Cell Total RNA Isolation Kit 세포로부터의 Total RNA Isolation Purification Kit
키트 설명:
다양한 배양세포로부터 11분만에 고순도 고품질의 total RNA를 얻을 수 있습니다.
RNase 프리
상온(15-25℃)에서 작동
DNA 세척 컬럼 포함
높은 RNA 수율
빠름: 11분만에 추출 완료
안전: 없음 유기 화학
설명
본 kit는 Foregene에서 개발한 spin column과 formula를 사용하여 96, 24, 12, 6-well plate에서 배양된 cell로부터 고순도, 고품질의 total RNA를 효율적으로 추출할 수 있습니다.
이 키트는 효율적인 DNA-Cleaning Column을 제공하여 상등액과 세포 용해물을 쉽게 분리하고 genomic DNA를 결합 및 제거할 수 있습니다.작업이 간단하고 시간이 절약됩니다..
TRNA 전용 컬럼은 고유한 공식으로 RNA를 효율적으로 결합할 수 있습니다.많은 샘플을 동시에 처리할 수 있습니다.
키트 구성품
| 키트 구성 | RE-03111 | RE-03114 |
| 50T | 200T | |
| 버퍼 cRL1* | 25ml | 100ml |
| 버퍼 cRL2 | 15ml | 60ml |
| 버퍼 RW1* | 25ml | 100ml |
| 버퍼 RW2 | 24ml | 96ml |
| RNase 프리 ddH2O | 10ml | 40ml |
| RNA 전용 컬럼 | 50 | 200 |
| DNA 세척 컬럼 | 50 | 200 |
| 지침 | 1 | 1 |
*Buffer cRL1 및 Buffer RW1에는 자극적인 카오트로픽 염이 포함되어 있으므로 작업 중에는 장갑을 착용하고 보호 조치를 취하십시오.
기능 및 장점
■ 전 공정을 상온(15-25℃)에서 시행하며 ice bath 및 저온 원심분리를 하지 않습니다.
■ 전체 키트는 RNase-Free이므로 RNA 분해를 걱정할 필요가 없습니다.
■ DNA-Cleaning Column은 DNA에 특이적으로 결합하여 DNase를 추가하지 않고도 genomic DNA 오염을 제거할 수 있는 키트입니다.
■ 높은 RNA 수율: RNA 전용 컬럼과 고유한 포뮬러로 효율적으로 RNA를 정제할 수 있습니다.
■ 빠른 속도: 조작이 간편하여 11분이면 완료할 수 있습니다.
■ 안전성: 유기 시약이 필요하지 않습니다.
■ 고품질: 정제된 RNA는 순도가 높고 단백질 및 기타 불순물이 없으며 다양한 후속 실험에 사용할 수 있습니다.
키트 적용
96, 24, 12, 6-well plate의 배양세포로부터 total RNA를 추출 및 정제하는데 적합합니다.
작업 흐름
도표
Cell Total RNA Isolation Kit의 agarose gel 배터리 다이어그램은 위의 여러 세포 수를 처리하고, 20μl 부피 용출, 2μl의 정제된 total RNA 1%를 취합니다.
보관 및 유효 기간
키트는 상온(15~25℃)에서 12개월, 2~8℃에서 더 오래(24개월) 보관할 수 있습니다.
Buffer cRL1은 2-hydroxy-1-ethanethiol(선택 사항)을 첨가한 후 4℃에서 1개월 동안 보관할 수 있습니다.
RNA가 추출되지 않거나 RNA 수율이 낮음
조직 샘플 RNA 함량, 작업 방법, 용출량 등과 같이 회수 효율에 영향을 미치는 다양한 요인이 있는 경우가 많습니다.
1. 작동 중 빙욕 또는 극저온(4°C) 원심분리를 수행했습니다.
권장 사항: 전 과정에 걸쳐 실온(15-25 °C)에서 작동하고 저온에서 얼음 목욕 및 원심분리기를 사용하지 마십시오.
2. 부적절한 시료 보존 또는 과도한 시료 보관 시간.
권장 사항: 샘플을 -80°C에 보관하거나 액체 질소에 동결하고 반복적인 동결-해동 사용을 피하십시오.RNA 추출을 위해 신선한 조직 또는 배양 세포를 사용하십시오.
3. 샘플 용해가 불충분합니다.
권장 사항: 조직을 균질화할 때 조직이 충분히 균질화되고 조직 세포가 RNA 방출을 설명할 수 있을 만큼 충분히 분할되는지 확인하십시오.
4. 용리액이 올바르게 추가되지 않았습니다.
권장 사항: RNase-Free ddH인지 확인2O는 정제 컬럼 멤브레인의 중간에 적가됩니다.
5. Buffer RL2 또는 Buffer RW2에 정확한 양의 무수 에탄올이 추가되지 않았습니다.
권장 사항: 키트를 사용하기 전에 지침에 따라 Buffer RL2 및 Buffer RW2에 정확한 양의 무수 에탄올을 추가하고 잘 혼합하십시오.
6. 조직 샘플 용량이 적절하지 않습니다.
권장 사항: 조직 10-20mg 또는 (1-5) × 10 사용6500 μl 버퍼 RL1당 세포, 과도한 조직 사용으로 RNA 추출이 감소할 수 있습니다.
7. 부적절한 용출량 또는 불완전한 용출.
권장 사항: 정제 컬럼의 용출 부피는 50-200 μl입니다.용출 효과가 만족스럽지 않은 경우 예열된 RNase-Free ddH를 추가한 후 실온 배치 시간을 연장하는 것이 좋습니다.2O, 예를 들어 5-10분 동안.
8. Buffer RW2 세척 후 정제 컬럼에 에탄올 잔류물이 있습니다.
권장 사항: Buffer RW2 세척 후 에탄올 잔류물이 있는 경우 공관 원심분리를 1분 동안 수행하거나 공관 원심분리 작업 시간을 2분으로 늘리거나 정제 컬럼을 실온에 5분 동안 두어 잔류 에탄올을 충분히 제거할 수 있습니다.
정제된 RNA가 분해됨
정제된 RNA의 품질은 샘플의 보존, RNase 오염 및 조작 등과 같은 요인과 관련이 있습니다.
1. 조직 샘플이 제 시간에 보관되지 않습니다.
권장 사항: 조직 샘플 또는 세포를 수집 후 적시에 사용하지 않는 경우 즉시 -80 °C 또는 액체 질소에서 냉동 보존하십시오.RNA를 추출하려면 가능할 때마다 새로 채취한 조직 또는 세포 샘플을 사용하십시오.
2. 조직 샘플의 반복적인 동결-해동.
권장사항: 조직 검체를 보관할 때 반복적인 동결-해동 및 RNA 분해를 피하기 위해 조직 검체를 작은 조각으로 잘라 보존하는 것이 가장 좋으며, 사용 시에는 조각 중 하나를 제거하십시오.
3. 수술 중 RNase를 주입하거나 일회용 장갑, 마스크 등을 착용하지 않은 경우.
권장 사항: RNA 추출 실험은 별도의 RNA 조작실에서 수행하는 것이 가장 좋으며 실험 전에 테이블을 비웁니다.
RNase 도입으로 인한 RNA 분해를 최소화하기 위해 실험 중에 일회용 장갑과 마스크를 착용하십시오.
4. 시약은 사용 중에 RNase로 오염됩니다.
권장 사항: 관련 실험을 위해 새로운 Animal Total RNA Isolation Kit로 교체하십시오.
5. RNA 조작에 사용되는 원심분리기 튜브, 팁 등이 RNase로 오염되어 있습니다.
권장사항: RNA 추출에 사용되는 원심분리기 튜브, 팁, 파이펫 등이 모두 RNase-Free인지 확인하십시오.
정제된 RNA는 다운스트림 실험에 영향을 미칩니다.
정제 컬럼에 의해 정제된 RNA는 염 이온, 단백질 함량이 너무 크면 역전사, 노던 블롯 등의 다운스트림 실험에 영향을 미칩니다.
1. 용출된 RNA에는 염 이온 잔류물이 있습니다.
권장 사항: Buffer RW2에 정확한 양의 에탄올이 추가되었는지 확인하고 작동에 표시된 원심 속도로 정제 컬럼 세척을 2회 수행하십시오.염 이온 잔류물이 있는 경우 정제 컬럼을 실온에서 5분 동안 Buffer RW2에 두고 원심 분리를 수행하여 염 오염 제거를 최대화합니다.
2. 용출된 RNA의 에탄올 잔류물.
권장사항: Buffer RW2 세척 후 작동에 표시된 원심분리 속도로 공관 원심분리 작동을 수행하는지 확인하고, 여전히 에탄올 잔류물이 있는 경우 공관 원심분리 작동 시간을 2분으로 늘리거나 실온에서 5m 동안 방치하십시오.
