1. 5개 이상의 RNA의 기능을 말하십시오.
Transfer RNA tRNA Transfer amino acid Ribosome RNA rRNA Ribosome은 메신저 RNA mRNA를 구성 단백질 합성 주형 Heterogeneous nuclear RNA hnRNA 성숙한 mRNA의 전구체 small nuclear RNA snRNA hnRNA splicing에 관여 Small cytoplasmic RNA scRNA/7SL-RNA protein Plasma reticulum-localized and synthetic signal recognition body components Antisense RNA anRNA/micRNA 유전자 발현 조절 Ribozyme RNA Enzymatically active RNA
2. 원핵 및 진핵 프로모터의 주요 차이점은 무엇입니까?
원핵생물 TTGACA --- TATAAT------개시 부위-35 -10 진핵 생물 인핸서---GC ---CAAT----TATAA-5mGpp-개시 부위-110 -70 -25
3. 천연 플라스미드의 인공 구성의 주요 측면은 무엇입니까?
천연 플라스미드는 결함이 있는 경우가 많기 때문에 유전 공학용 캐리어로 사용하기에 적합하지 않으며 수정 및 구성해야 합니다. a.선택에 사용하기 쉬운 두 개 이상의 적절한 선택 마커 유전자, 일반적으로 항생제 유전자를 추가합니다.비.재조합을 촉진하기 위해 적합한 효소 절단 부위를 늘리거나 줄입니다.씨.길이를 줄이고 불필요한 조각을 잘라내어 수입 효율을 높이고 적재량을 늘립니다.디.더 적은 사본에서 더 많은 사본으로 레플리콘을 꽉 조이는 것에서 느슨한 것으로 변경하십시오.이자형.유전 공학의 특별한 요구 사항에 따라 특별한 유전 요소를 추가하십시오.
4. 조직 특이적 cDNA의 감별 스크리닝 방법의 예를 들어 보시겠습니까?
2개의 세포군을 준비하여 한 세포에서는 목적 유전자가 발현되거나 높게 발현되고, 다른 세포에서는 목적 유전자가 발현되지 않거나 적게 발현되어 혼성화 및 비교를 통해 목적 유전자를 찾는다.예를 들어, 종양이 발생하고 발달하는 동안 종양 세포는 정상 세포와 다른 발현 수준의 mRNA를 제시합니다.따라서 차등 혼성화를 통해 종양 관련 유전자를 선별할 수 있습니다.유도 방법은 또한 발현이 유도된 유전자를 스크리닝하는 데 사용될 수 있습니다.
5. 하이브리도마 세포주의 생성 및 스크리닝?
비장 B 세포 + 골수종 세포에 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 추가하여 세포 융합을 촉진하고, HAT 배지(하이포크산틴, 아미노프테린, T 포함)에서 성장한 비장 B-골수종 융합 세포는 계속해서 영양분을 확장합니다.세포 융합에는 다음이 포함됩니다. 비장-비장 융합 세포: 성장할 수 없으며, 비장 세포는 시험관 내에서 배양할 수 없습니다.뼈-뼈 융합 세포: 하이포크산틴을 사용할 수 없지만 엽산 환원 효소를 사용하여 두 번째 경로를 통해 퓨린을 합성할 수 있습니다.Aminopterin은 엽산 환원 효소를 억제하므로 성장할 수 없습니다.뼈-비장 융합 세포: HAT에서 자랄 수 있고, 비장 세포는 하이포크산틴을 이용할 수 있으며, 뼈 세포는 세포 분열 기능을 제공합니다.
6. 디데옥시 말단 종결법(Sanger method)으로 DNA의 1차 구조를 결정하는 원리와 방법은 무엇인가?
원리는 뉴클레오티드 사슬 터미네이터(2,,3,-디데옥시뉴클레오티드)를 사용하여 DNA의 확장을 종료하는 것입니다.3/5/포스포다이에스터 결합 형성에 필요한 3-OH가 부족하기 때문에 일단 DNA 사슬에 통합되면 DNA 사슬은 더 이상 확장될 수 없습니다.염기쌍의 원리에 따르면, DNA 중합효소가 정상적으로 확장된 DNA 사슬에 참여하기 위해 dNMP가 필요할 때마다 두 가지 가능성이 있습니다.다른 하나는 dNTP에 참여하여 DNA 사슬이 다음 ddNTP가 통합될 때까지 계속 확장될 수 있도록 하는 것입니다.이 방법에 따르면 ddNTP로 끝나는 길이가 다른 DNA 단편 그룹을 얻을 수 있습니다.방법은 각각 ddAMP, ddGMP, ddCMP 및 ddTMP의 네 그룹으로 나누는 것입니다.반응 후, 폴리아크릴아미드 겔 전기영동은 수영 밴드에 따라 DNA 서열을 읽을 수 있습니다.
7. 전사에 대한 활성제 단백질(CAP)의 양성 조절 효과는 무엇입니까?
cAMP(Cyclic adenylate) 수용체 단백질 CRP(cAMP receptor protein)는 cAMP와 CRP가 결합하여 형성되는 복합체를 CAP(cAMPactivated protein)이라고 합니다.글루코스가 부족한 배지에서 대장균을 키우면 CAP의 합성이 증가하는데 CAP는 유당(Lac)과 같은 촉진제를 활성화시키는 기능을 한다.일부 CRP 의존적 프로모터에는 일반적인 프로모터가 갖는 전형적인 -35 영역 서열 특징(TTGACA)이 없습니다.따라서 RNA 중합효소가 결합하기 어렵습니다.CAP(기능)의 존재: 효소와 프로모터의 결합 상수를 크게 향상시킬 수 있습니다.주로 다음과 같은 두 가지 측면을 보여준다. ① CAP는 프로모터의 형태와 효소와의 상호작용을 변화시켜 효소 분자가 올바르게 방향을 잡도록 도와주어 -10 영역과 결합하여 -35 영역의 기능을 대체하는 역할을 한다.②CAP는 또한 RNA 중합효소가 DNA의 다른 부위에 결합하는 것을 억제하여 특정 프로모터에 결합할 확률을 높일 수 있습니다.
8. 일반적인 DNA 재조합 실험에는 일반적으로 어떤 단계가 포함됩니까?
ㅏ.기증자 유기체의 표적 유전자(또는 외인성 유전자)를 추출하고 이를 다른 DNA 분자(클로닝 벡터)에 효소적으로 연결하여 새로운 재조합 DNA 분자를 형성합니다.비.재조합 DNA 분자를 수용자 세포로 옮기고 복제하고 수용자 세포에서 보존합니다.이 프로세스를 변환이라고 합니다.씨.재조합 DNA를 흡수한 수용체 세포를 스크리닝하고 식별합니다.디.외래 원조 유전자의 발현 여부를 검출하기 위해 재조합 DNA를 포함하는 세포를 대량 배양한다.
9. 유전자 라이브러리의 구축 재조합체의 스크리닝 방법은 3가지이며 그 과정을 간략히 기술한다.
항생제 내성 스크리닝, 내성의 삽입 불활성화, 청백점 스크리닝 또는 PCR 스크리닝, 감별 스크리닝, DNA 프로브 대부분의 클로닝 벡터는 항생제 내성 유전자(항암피실린, 테트라사이클린)를 가지고 있습니다.플라스미드가 대장균으로 전달되면 박테리아는 저항성을 획득하고 전달되지 않은 박테리아는 저항성을 갖지 않습니다.그러나 개편 여부를 구분할 수는 없다.두 개의 저항성 유전자를 포함하는 벡터에서 외래 DNA 단편이 유전자 중 하나에 삽입되어 유전자가 비활성화되면 서로 다른 약물을 포함하는 두 개의 플레이트 컨트롤을 사용하여 양성 재조합체를 스크리닝할 수 있습니다.예를 들어, pUC 플라스미드는 발색 기질 X-gal(5-브로모-4-클로로-3-인돌-β-D-갈락토사이드)을 분해하여 파란색을 생성할 수 있는 LacZ 유전자(β-갈락토시다아제를 암호화함)를 포함하고 있으므로 균주를 파란색으로 만듭니다.외래 DNA를 삽입하면 LacZ 유전자가 발현되지 않고 균주가 하얗게 되어 재조합균을 선별한다.
10. 배아줄기세포를 통해 형질전환 동물을 얻는 기본적인 과정을 설명하시오.
배아줄기세포(Embryonic Stem Cell, ES)는 배아 발생 단계의 배아 세포로서 인공적으로 배양 및 증식이 가능하고 다른 유형의 세포로 분화하는 기능을 가지고 있습니다.ES 세포 배양: 배반포의 내부 세포 덩어리를 분리하여 배양합니다.ES가 피더가 없는 층에서 배양되면 근육 세포 및 N 세포와 같은 다양한 기능 세포로 분화됩니다.섬유아세포가 포함된 배지에서 배양하면 ES는 분화 기능을 유지합니다.ES는 유전적으로 조작될 수 있으며, 그것의 분화 기능은 그것의 분화 기능에 영향을 미치지 않고 통합될 수 있어 무작위 통합 문제를 해결합니다.배아줄기세포에 외인성 유전자를 도입한 후 임신한 암컷 쥐의 자궁에 이식하여 새끼로 발달하고 교배하여 동형접합체 쥐를 얻습니다.