여:형님, 역전사가 완료되고 드디어 마지막 단계인 형광 정량 PCR!형님, 실시간 정량 PCR이 무엇인가요?
M:PCR 항상 알고 계시죠?
여: 알다시피, PCR은 중합효소 연쇄반응이고 DNA를 증가시키는 기술입니다!
남: 거의… 표적 염기서열을 특정 프라이머를 통해 100만 배 이상으로 증폭시키는 기술적인 방법인데, 이것은 표적 염기서열의 유무만을 나타낼 뿐 초기 주형의 양을 결정할 수는 없다.형광 정량적 PCR은 이러한 문제를 해결하기 위해 개발된 기술적인 방법입니다.실시간 PCR 및 정량 PCR(qPCR)을 일반적으로 지칭한다.
여: 일반적인 PCR과의 차이점은 형광 정량법에 있습니까?
남: 네, 즉 각 PCR 사이클의 연장 단계에서 형광 신호 강도를 감지하고 신호 강도의 변화에 ​​따라 초기 템플릿 양을 계산할 수 있습니다.
여: 너무 복잡해!이거 제가 직접 계산해야 하나요?
남: 이것은 당신이 천천히 배울 것을 요구합니다. 원리를 이해할 수 있는 것이 가장 좋습니다.이제 상대적으로 직관적인 실험 데이터인 CT 값에 먼저 집중할 수 있으며 그 크기는 초기 템플릿 양의 크기에 해당합니다.증폭 곡선과 용융 곡선과 같은 그래프도 있습니다.그들은 실험의 성공 여부에 대한 최종 결정권을 가지고 있습니다.
여: 오, 형제여.그럼 qPCR 실험을 해볼게요!
남: 시약 영역에 템플릿을 추가하지 않도록 각별히 주의하세요. 그렇지 않으면 사용하지 않은 믹스가 쉽게 오염될 수 있습니다!
여: 알았다!

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