문제 분석 가이드

에서 발생할 수 있는 문제에 대한 다음 분석공장 합계RNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

스핀 컬럼 막힘

스핀 컬럼이 막히면 RNA 수율이 감소하거나 RNA를 얻기 위해 정제할 수 없으며, 얻은 RNA의 품질이 낮아집니다.

일반적인 원인 분석:

1. 샘플이 완전히 깨지지 않았습니다.

불완전한 샘플 조각화는 DNA-Cleaning Column을 차단할 수 있으며, 이는 RNA 수율 및 품질에도 영향을 미칠 수 있습니다.시료 조각화 시 시료의 세포벽, 세포막 등의 조직을 최대한 분해할 수 있도록 충분한 양의 액체질소에서 빠르게 분쇄하는 것을 권장합니다.폴리페놀 다당류 식물 샘플의 경우 Plant Total RNA Isolation Kit Plus를 사용하는 것이 좋습니다.

2.DNA-Cleaning Column에서 분리된 상청액을 흡인하고 가능한 세포 파편 펠릿을 흡인합니다.

흡인된 세포 파편 펠릿은 RNA 흡착 절차 중에 RNA 전용 컬럼을 막을 수 있습니다(절차의 5단계, 다당류 폴리페놀 절차의 6단계 참조).세포 파편이 흡인되지 않도록 이 상층액을 흡인할 때 주의를 기울여야 합니다.

3. 샘플의 초기 양이 너무 많습니다.

샘플을 과도하게 사용하면 불완전한 샘플 조각화 또는 Buffer PRL1 또는 Buffer PSL1에 의한 세포의 불완전한 용해가 발생하여 정제 작업을 위한 정제 컬럼이 막히게 됩니다.Plant Total RNA Isolation Kit는 작동 샘플의 단일 정제당 초기 최대값이 50mg입니다.폴리페놀 다당류의 식물 샘플의 경우 Plant Total RNA Isolation Kit Plus를 사용해 볼 것을 권장합니다.

4. 원심 분리기의 온도가 너무 낮습니다.

샘플 조직의 액체 질소 파괴를 제외한 전체 RNA 분리 및 정제, 모든 단계는 실온(20-25°C)에서 수행됩니다.일부 저온 원심 분리기의 온도는 20°C 미만이므로 DNA-Cleaning Column 및/또는 RNA-only Column이 막힐 수 있습니다.이 경우 원심분리기 온도를 20-25°C로 설정하고 용해 혼합물 및/또는 에탄올 분리 상층액을 37°C로 미리 데우십시오.

추출된 RNA가 없거나 RNA 수율이 낮음

일반적으로 샘플 RNA 함량, 작업 방법, 용출량 등과 같이 회수 효율에 영향을 미치는 많은 요인이 있습니다.

아래와 같은 일반적인 원인 분석:

1. 작업 중 ice bath 또는 저온(4°C) 원심 분리를 수행했습니다.

제안: 전 과정에서 실온(15-25°C)에서 작동하고 얼음 목욕 및 저온 원심 분리를 하지 마십시오.

       2.샘플의 부적절한 보존 또는 샘플의 장기 보존으로 인해 RNA가 저하되었습니다.

권장 사항: 갓 수집한 샘플은 액체 질소에서 급속 냉동한 다음 -80°C에서 장기간 보관해야 하며 반복적인 동결 및 해동을 피해야 합니다.또는 즉시 샘플을 RNA 안정제 RNAlater 용액(동물 샘플)에 담급니다.

       3.불충분한 시료 단편화 및 용해로 인해 정제 컬럼이 막힐 수 있습니다.

제안: 조직을 연마할 때 조직이 충분히 연마되었는지 확인하고 미리 준비된 버퍼 PSL1로 신속하게 옮기십시오(정확한 비율의 β-ME가 추가되었는지 확인, 절차의 1단계 참조).

4. 용리액이 잘못 추가되었습니다.

제안: RNase-Free ddH가₂O는 정제 컬럼 멤브레인의 중간으로 떨어집니다.

5. Buffer PSL2 또는 Buffer PRW2에 정확한 양의 무수 에탄올이 추가되지 않았습니다.

제안: 지침을 따르고 키트를 사용하기 전에 정확한 양의 무수 에탄올을 Buffer PSL2 및 Buffer PRW2에 추가하고 잘 혼합하십시오.

6. 조직 샘플의 양이 부적절합니다.

제안: 버퍼 PSL1 500μl당 조직 50mg을 사용하십시오.너무 많은 조직을 사용하면 추출된 RNA의 양이 줄어들고 생성된 RNA의 순도도 감소합니다.초기 샘플 용량은 RNA 추출 작업당 50mg을 초과하지 않아야 합니다.

7. 부적절한 용출량 또는 불완전한 용출.

제안: 정제 컬럼의 용리액 부피는 50-200 μl입니다.용출 효과가 만족스럽지 않은 경우 예열된 RNase-Free ddH를 추가한 후 실온에서 시간을 연장하는 것이 좋습니다.₂O, 예를 들어 5-10분.

8. 버퍼 PRW2로 세척한 후 정제 컬럼에 에탄올 잔류물이 있습니다.

   제안: 빈 튜브를 1분 동안 원심분리하고 Buffer PRW2에서 세척한 후에도 여전히 에탄올이 남아 있는 경우 빈 튜브 원심분리 시간을 2분으로 늘리거나 정제 컬럼을 실온에서 5분 동안 두어 잔류 에탄올을 완전히 제거할 수 있습니다.

9. 키트를 잘못 사용했습니다.

   제안: 폴리페놀 다당류 식물 샘플의 경우 Plant Total RNA Isolation Kit와 같은 일반적인 키트를 사용하면 이상적인 RNA 샘플을 얻지 못할 수 있습니다.폴리페놀계 다당류 식물 샘플용으로 특별히 설계된 Plant Total RNA IsolationKit Plus를 사용하는 것이 좋습니다.폴리페놀 및 다당류 식물 시료에서 RNA를 추출하기 위해 특별히 개발된 키트입니다.

OD260/OD280 값이 낮음

ddH를 이용한 RNA 용출₂O 및 분광광도계 판독값에 사용하면 OD260/OD280 값이 낮아집니다.10mM Tris-HCl, pH 7.5 사용을 권장합니다(RNase-Free ddH 대신)₂O를 사용하여 RNA 용출) 비교적 정확한 OD260/OD280 값을 얻으려면 19페이지의 "RNA 농도 및 정제 분석"을 참조하십시오.

정제된 RNA는 분해됩니다.

정제된 RNA의 품질은 샘플 보존, RNase 오염 및 조작과 같은 요인과 관련이 있습니다.

일반적인 원인 분석:

1. 조직 샘플은 수집 후 제 시간에 보관되지 않았습니다.

    권장사항 : 조직 검체를 채취 후 제때 사용하지 않을 경우 즉시 저온의 액체질소에 보관하거나 액체질소에서 급속냉동 후 장기보관을 위해 -80°C로 옮겨 보관하거나 즉시 RNA 안정제 RNAlater 용액(동물검체)에 침지한다.RNA 추출의 경우 새로 수집한 조직 샘플을 사용하십시오.

2. 조직 샘플의 반복적인 동결 및 해동.

   제안: 조직 검체를 보관할 때 보존을 위해 작게 잘라 보관하고, 반복적인 동결과 해동으로 인한 RNA 분해를 방지하기 위해 사용 시 일부를 꺼내어 보관하는 것이 가장 좋습니다.

3.수술실에 RNase가 도입되었거나 일회용 장갑, 마스크 등을 착용하지 않은 경우

   제안: RNA 추출 실험은 별도의 RNA 작업에서 가장 잘 수행되며, 실험실 테이블은 실험 전에 청소해야 하며, RNase 도입으로 인한 RNA 분해를 최대한 방지하기 위해 실험 중에는 일회용 장갑과 마스크를 착용해야 합니다.

4. 시약은 사용 중 RNase에 의해 오염됩니다.

   제안: 관련 실험을 위해 새로운 식물 총 RNA 추출 키트 시리즈로 교체하십시오.

5. RNA 조작에 사용되는 원심분리기 튜브와 피펫 팁이 RNase로 오염되어 있습니다.

제안: RNA 추출에 사용되는 원심분리기 튜브, 피펫 팁, 피펫 등이 모두 RNase-Free인지 확인하십시오.

사용 설명서:

Plant Total RNA Isolation Kit 사용 설명서