저자: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

단위: 퉁지대학교 부속 자오저우 병원, 둥팡 병원

현재 호흡기 병원체 핵산 검출을 위한 주요 샘플 유형은 인후 면봉입니다.일반적으로 사용되는 많은 종류의 샘플 보존 솔루션이 있으며, 모두 운송 및 보관을 위해 냉장 또는 냉동해야 합니다.수집 및 운송 과정에서 저온의 전 과정 제어가 어렵고 시료 검사 전 품질 관리가 어렵습니다.^[1-2].

RNase(RNase)는 RNA를 가수분해하는 엔도뉴클레아제로, 주로 뉴클레오티드 사이의 포스포디에스테르 결합을 절단합니다.RNase 분자는 매우 안정적이고, 구조에 이황화 결합이 있고, 그 활성이 2가 양이온의 존재를 필요로 하지 않기 때문에 RNase는 쉽게 변성되지 않으며 고온이나 변성제 사용 후에도 쉽게 재생됩니다.RNase는 내인성과 외인성으로 나뉩니다.내인성 RNase는 세포가 파열될 때 동시에 방출될 수 있습니다.따라서 내인성 RNase의 역할을 제거하는 것은 RNA 추출 과정에서 매우 중요한 단계입니다.외인성 RNase는 널리 분포되어 있습니다.RNases는 공기, 사람의 피부, 머리카락, 타액에 존재하며 이는 RNA가 쉽게 분해되는 중요한 이유입니다.^[삼].

데이터 쿼리

CANS-CL02-A009 기술 요구 사항의 "분자 진단 분야의 의료 실험실 품질 및 역량 인증 지침 적용"은 적용에 따라 적절한 수질 표준을 공식화해야 함을 제안합니다.일회용 밀폐 용기:

RNase/분류

(1) RNase A

소 췌장에서 유래된 리보뉴클레아제 A(RNase A)는 RNA에 있는 피리미딘 잔기의 3' 말단을 특이적으로 공격할 수 있는 엔도리보뉴클레아제로 인접한 뉴클레오티드에 의해 형성된 시토신 또는 우라실을 절단합니다.포스포디에스테르 결합, 반응의 최종 생성물은 3' 피리미딘 뉴클레오티드 및 말단에 3' 피리미딘 뉴클레오티드가 있는 올리고뉴클레오티드입니다.

(2) RNase T1

Ribonuclease T1(RNase T1)은 Aspergillus orjzae에서 파생되며 구아닌의 3' 말단 인산염에 특이적으로 작용하며 절단 부위는 구아닌의 3' 인산염과 인접한 뉴클레오티드의 5' 하이드록실 사이에 있습니다.반응의 최종 생성물은 3'구아닐산 및 말단에 3'구아닐산이 있는 올리고뉴클레오티드 단편이다.

(3) RNase H

리보뉴클레아제 H(RNase H)는 송아지 흉선 조직에서 처음 발견되었으며, 이를 암호화하는 유전자가 대장균에 클로닝되었습니다.DNA를 분해할 수 있습니다: RNA 하이브리드 듀플렉스의 RNA 가닥은 3'-OH 및 5'-모노포스페이트 말단을 갖는 올리고뉴클레오티드 및 모노뉴클레오티드를 생성하며, 단일 또는 이중 가닥 DNA 또는 RNA를 분해할 수 없습니다.

RNase

기능 및 용도

리보뉴클레아제는 리보핵산(RNA)의 분해를 촉매할 수 있으며 인공적으로 합성될 수 있습니다.약용 연고는 외상 및 관절 통증을 치료하기 위해 국소적으로 사용됩니다.보고서에 따르면, 리보뉴클레아제는 숙주 세포 대사를 변화시키고, 바이러스 합성을 억제하고, 시험관 내에서 인플루엔자 바이러스의 증식을 억제하고, 닭 배아에서 백시니아 및 헤르페스 바이러스의 형성을 억제할 수 있습니다.유행성 뇌염의 치료에 유익한 리보뉴클레아제 매일 180mg의 근육내 주사의 임상적 사용, 리보뉴클레아제는 리보핵산(RNA)의 분해를 촉매할 수 있으며 이제 인공적으로 합성될 수 있습니다.약용 연고는 외상 및 관절 통증을 치료하기 위해 국소적으로 사용됩니다.보고서에 따르면, 리보뉴클레아제는 숙주 세포 대사를 변화시키고, 바이러스 합성을 억제하고, 시험관 내에서 인플루엔자 바이러스의 증식을 억제하고, 닭 배아에서 백시니아 및 헤르페스 바이러스의 형성을 억제할 수 있습니다.ribonuclease 1일 180mg 근육주사의 임상적 사용은 유행성 뇌염의 치료에 유익합니다.

RNase

억제제 정의

RNase 억제제 단위의 정의: 5ng RNase A 활성의 50%를 억제하는 데 필요한 효소의 양은 1 단위입니다.

RNase 억제제의 작동 방식

구아니딘 이소티오시아네이트:

구아니딘 이소티오시아네이트는 분자식이 C2H6N4S인 유기 화합물입니다.주로 생물의학, 화학시약 등에 사용된다. Guanidine isothiocyanate는 단백질 용해제로 분자진단시약의 용해액의 주성분으로 많이 사용된다.조직을 용해하고 세포 구조를 파괴하며 핵단백질에서 핵산을 분리할 수 있으며 RNase에 대한 강한 변성을 가지고 있습니다.현재 가장 효과적인 RNase 억제제입니다.

TRIzol은 세포나 조직에서 직접 total RNA를 추출할 수 있는 새로운 total RNA 추출 시약입니다.여기에는 페놀 및 구아니딘 이소티오시아네이트와 같은 물질이 포함되어 있어 세포를 빠르게 파괴하고 세포에서 방출되는 뉴클레아제를 억제할 수 있습니다.

(그러나 구아니딘 이소티오시아네이트는 실험실 연구원의 건강에 위험합니다.)

알나신:

쥐의 간이나 사람의 배반엽에서 추출한 산성 당단백질.Rnasin은 다양한 RNase에 결합하여 비활성화할 수 있는 RNase의 비경쟁적 억제제입니다.

(자세한 내용:https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

H높은 온도:

고온은 또한 단백질 변성의 일반적인 수단입니다.

디에틸피로카보네이트(DEPC):

DEPC는 강력하지만 불완전한 RNase 억제제로서 RNase 활성 그룹의 아미노산 이미다졸 고리와 결합하여 단백질을 변성시켜 RNase 활성을 억제할 수 있습니다.

바나딜 리보뉴클레오사이드 복합체:

바나듐 산화물 이온과 뉴클레오사이드로 구성된 복합체로 전이 물질 형태로 RNase에 결합하여 RNase의 활성을 거의 완전히 억제할 수 있음

다른:

SDS, 요소, 규조토 등도 RNase에 일정한 억제 효과가 있습니다.

전문가 리뷰

Li Yujie 수석 기술자

퉁지대학교 부속 동팡병원 자오저우병원 검사실 과장

외인성 RNase의 생분해를 방지하기 위해 RNA 추출 과정에서 마스크, 장갑, 모자를 착용하고 자주 교체해야 합니다.모든 유리 제품은 200°C의 건조 오븐에서 2시간 이상 구워야 합니다.플라스틱과 같이 베이킹에 사용되는 재료는 DEPC 물로 처리한 다음 증류수로 세척해야 합니다.RNA의 추출, 보존 및 동정에 사용되는 시약이나 장치는 RNA 전용이어야 하며, 독립적인 RNA 작업 영역을 설정해야 합니다.

참조:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J 등.원주민 호주 어린이[J]에서 급성 하기도 감염이 시작되기 직전에 비인두의 박테리아 및 바이러스.Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37(9): 1785-1794.

[2] 중국 예방 의학 협회의 병원 감염 통제 분과.임상 미생물 표본 수집 및 검사 지침 [J].중국병원감염학회지, 2018(20):3192-3200.

[3] "임상 시험 만개 왜 분자생물학 시험량"