PCR 반응을 할 때 누구나 이런저런 문제에 항상 부딪히게 될 것이라고 생각하지만, 대부분은 크게 두 가지 문제로 분류할 수 있습니다.

유전자 주형의 너무 적은 증폭(증폭);
너무 많은 비표적 유전자 증폭.
첨가제를 사용하는 것은 이러한 문제를 해결하기 위한 일반적인 전략 중 하나입니다.일반적으로 첨가제의 역할에는 두 가지 측면이 있습니다.
2차 구조유전자(2차 구조);
비특이적 프라이밍을 줄입니다.
오늘 에디터는 PCR 반응에서 흔히 사용되는 첨가물과 그 기능에 대해 간략하게 소개합니다.
2차 구조를 감소시키는 첨가제
설폭사이드(DMSO)
유전자 샘플GC 함량이 높은 .그러나 DMSO는 또한 Taq 중합효소 활성을 크게 감소시킵니다.따라서 모든 사람은 주형 접근성과 중합효소 활동의 균형을 맞춰야 합니다.편집자는 실험에 적합한 농도를 찾기 위해 2%에서 10%까지 다양한 농도의 DSMO를 시도할 수 있다고 제안합니다.
비이온 세제
0.1-1% Triton X-100, Tween 20 또는 NP-40과 같은 비이온성 세제는 일반적으로 DNA 2차 구조를 감소시킵니다.이것은 주형 유전자의 증폭을 증가시킬 수 있지만, 비특이적 증폭의 문제도 야기할 것입니다.따라서 이러한 첨가제는 파편이 없는 저수율 PCR 반응에는 잘 작동하지만 상대적으로 불순한 PRC 반응에는 적합하지 않습니다.비이온 세제의 또 다른 이점은 SDS 오염 감소입니다.일반적으로 DNA 추출 과정에서 SDS는 PCR 단계로 가져와 중합 효소의 활성을 크게 억제합니다.따라서 반응에 0.5% Tween-20 또는 Tween-40을 추가하면 SDS의 부정적인 영향을 중화할 수 있습니다.
베타인_
베타인은 2차 구조 형성을 줄임으로써 DNA 증폭을 향상시킬 수 있으며 일반적으로 상업용 PCR 키트에 "수수께끼"로 추가됩니다.베타인을 사용하려면 베타인 또는 베타인 모노하이드레이트(Betaine 또는 Betaine mono-hydrate)를 넣어야 하지만 베타인 염산염(Betaine HCl)은 넣지 말고 최종 농도가 1~1.7M이 되도록 조절한다.베타인은 또한 DNA 용융/DNA 변성의 염기쌍 구성 의존성을 제거하기 때문에 특이성을 향상시키는 데 도움이 될 수 있습니다.
비특이적 프라이밍을 줄이기 위한 첨가제
포름아미드
포름아마이드는 일반적으로 사용되는 유기 PCR 첨가제입니다.그것은 DNA의 주요 홈 및 작은 홈과 결합하여 마스터 DNA 이중 나선의 안정성을 감소시키고 DNA의 녹는 온도를 낮출 수 있습니다.PCR 실험에 사용되는 포름아미드의 농도는 보통 1%-5%입니다.
테트라메틸염화 암모늄( TMAC)
테트라메틸암모늄 클로라이드는 혼성화의 특이성(hybridization specificity)을 증가시키고 DNA의 용융 온도를 증가시킬 수 있다.따라서 TMAC는 비특이적 프라이밍을 제거하고 DNA와 RNA의 잘못된 결합을 줄일 수 있습니다.당신이 사용하는 경우퇴화 프라이머PCR 반응에서 15-100mM의 농도로 일반적으로 사용되는 TMAC를 추가하는 것을 잊지 마십시오.
기타 일반적인 첨가제
위에서 언급한 첨가제의 두 가지 범주 외에도 PCR 반응에는 많은 일반적인 첨가제가 있지만 기능은 다르지만 매우 중요합니다.
마그네슘 이온
마그네슘 이온은 중합효소의 필수 보조인자(cofactor)입니다. 즉, 마그네슘 이온이 없으면 중합효소가 비활성화됩니다.그러나 너무 많은 마그네슘 이온도 중합효소의 효율에 영향을 미칠 수 있습니다.각 PCR 반응에서 마그네슘 이온의 농도는 다양합니다.킬레이트제(예: EDTA 또는 구연산염), dNTP 및 단백질의 농도는 모두 마그네슘 이온의 농도에 영향을 미칩니다.따라서 PCR 실험에 문제가 있는 경우 0.5–1mM 간격으로 1.0mM에서 4.0mM 사이의 다른 마그네슘 이온 농도를 변경할 수 있습니다.
다중 동결-해동 주기가 염화마그네슘 용액의 농도 계층화로 이어질 수 있다는 점은 주목할 가치가 있습니다.그러므로 매번 사용하기 전에 완전히 녹이고 잘 섞어서 사용해야 합니다.
소 혈청 알부민(소 알부민, BSA)
분자 화학 실험에서 소 혈청 알부민은 특히 제한 효소 소화 및 PCR 실험에서 매우 일반적인 첨가제입니다.PCR 반응에서 BSA는 페놀 화합물과 같은 오염 물질을 줄이는 데 도움이 됩니다.그리고 시험관 벽에 반응물의 부착을 줄일 수 있다고도 합니다.PCR 반응에서 일반적으로 첨가되는 BSA의 농도는 0.8mg/ml에 도달할 수 있습니다.
 
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