RNase는 RNA 추출 실험을 자주 하는 많은 학생들이 듣기 싫어하는 민감한 단어입니다.완전히 무장한 상태에서 최종적으로 독성이 강한 시약인 페놀과 클로로포름으로 추출한 RNA가 분해되었습니다.나는 화해하지 않는다!!!오늘은 그 유명한 Rnase의 유래에 대해 알아보도록 하겠습니다.

리보뉴클레아제(RNase) 또는 RNase는 RNA를 작은 분자로 가수분해할 수 있는 뉴클레아제입니다.소분자 단백질인 RNase는 매우 안정적입니다. .기존의 고온 고압 증기 멸균 및 단백질 억제제로는 완전히 비활성화할 수 없습니다.RNase의 안정성은 주로 구조의 이황화 결합에서 비롯됩니다.예를 들어, 일반적으로 사용되는 소 췌장의 RNase는 124개의 아미노산만 가지고 있지만 4개의 ​​이황화 결합을 포함합니다.황 결합과 이황화 결합은 RNase에 우수한 열 안정성을 부여합니다.또한, rnase는 상대적으로 분자량이 작고 많은 경우 원래 형태를 빠르게 복원할 수 있습니다.

매우 안정적일 뿐만 아니라,RNase는 실험실 어디에나 존재합니다. .RNase는 생물학적 방어 메커니즘입니다.세포의 경우 외인성 RNA는 종종 치명적입니다.외인성 DNA와 비교할 때 외인성 RNA는 종종 더 위험합니다.RNA는 행복하게 전사되고 번역되므로 거의 모든 유기체는 외인성 RNA의 침입을 방어하기 위해 RNase를 진화시켰습니다.그러므로 실험실에서 배양된 세균 세포와 RNA를 추출하는 당신은 RNase의 향기를 발산합니다.인체의 체액(타액, 눈물 등)에는 RNase가 많이 포함되어 있으므로 RNA가 분해되면 울지 마십시오.울수록 RNA 분해가 심해집니다!!Daiyu 자매는 RNA 추출에 적합하지 않습니다!

또한 연약한 당신의 피부에도 RNase가 많이 포함되어 있으며 피부에 닿은 마커, 피펫, 냉장고 문, 문 손잡이에도 RNase가 포함되어 있습니다.

장황하게 이야기하면서 RNase를 처리하는 방법을 살펴보겠습니다.

RNA를 제거할 때 누구나 가장 먼저 생각하는 것은DEPC(디에틸 피로카보네이트).DEPC는 주로 RNase 활성 그룹인 히스티딘의 이미다졸 고리와 결합하여 단백질을 변성시켜 효소의 활성을 억제합니다.0.1% DEPC는 Rnase에 대한 제거 효과가 더 좋을 수 있지만 DEPC는 알려진 발암 물질이므로 사용시 각별한 주의가 필요합니다.

RNase의 경우 두 가지 측면에서 시작해야 합니다.첫 번째는 내인성 RNase의 활성을 억제하는 것입니다.

Trizol에 포함된 구아니딘 이소티오시아네이트 및 DTT와 같은 기존의 RNA 추출 시약은 RNase의 이황화 결합을 열 수 있지만 특히 조직 샘플에는 여전히 일부 RNase가 있으므로 저온에 주의하십시오.

1.조직 샘플을 꺼낸 후 즉시 액체 질소 또는 시판되는 RNA 보존 용액에 담급니다.

2.세포 시료의 RNA를 추출한 후 lysis solution에 넣고 ice box에서 lyse

3. 연삭에는 액체 질소를 사용하는 것이 가장 좋습니다. 조직 샘플을 균질화할 때.액체 질소 없이 전기 균질기를 사용하는 경우 균질 어댑터를 완전히 사전 냉각하는 데 주의하십시오.

두 번째는 외인성 DNase입니다.

1.완전 무장하고 실험실 가운을 착용하고 마스크를 착용하고 새 장갑을 꼭 착용하세요(너무 검소하지 마세요!! Trizol은 초부식성이며 장갑을 통해서도 매우 강하므로 손에 떨어지지 않도록 주의해야 합니다).

2.사용된 모든 피펫 팁, EP 튜브, PCR 튜브 및 기타 장비는 de-RNase 처리되어야 합니다.0.1% DEPC에 담근 다음 고압으로 가압할 수 있습니다.흄 후드에서의 작업에 주의하십시오.지역 폭군은 효소 제거용 소모품을 직접 구입할 수 있습니다.

추신: 게으른 방법을 알려 드리겠습니다.높은 온도와 높은 압력으로 RNase를 완전히 제거할 수는 없지만 많은 부분을 제거합니다.2배의 고온고압은 효과가 좋으며, RNA 추출은 거의 효과가 없습니다.

삼.알코올은 단백질을 변성시킬 수 있으며,RNA 추출 테이블을 75% 알코올로 닦을 수 있도록 , 장갑에도 알코올을 뿌릴 수 있습니다.

4.최종 RNA 용해 용액과 원심분리 튜브도 de-RNase 처리해야 합니다.DEPC water는 일반적으로 사용되는 RNA 용해 용액입니다.DEPC 물의 올바른 준비 방법에 대해 이야기해 봅시다(시판 DEPC를 구입할 때 다시 포장해야 함을 기억하십시오).

초순수에 DEPC를 1:1000으로 넣고 잘 흔든 다음 37°C에서 하룻밤 방치하고 121°C 고온 고압에서 15분 동안 살균한다.DEPC 물은 1ml 분량으로 -20°C에서 보관할 수 있습니다.

마지막으로 요약하면 저온이 핵심이며 소모품을 잘 처리하고 완전히 무장하고 말을 적게 합니다!

자, 오늘의 전략은 여기까지입니다.언급하신 모든 RNA 농도와 순도를 기원합니다.A260/A280 모두 2.0입니다!!!

물론, 당신이 사용하는 경우상온 작동 RNA 추출 키트, 위의 문제가 발생하지 않을 수 있습니다.

DNase를 첨가하지 않고 상온에서 작동하여 11분 안에 세포에서 total RNA를 추출하고, 동물 조직이나 식물에서 30분 안에 total RNA를 추출합니다.

시험용 샘플은 다음으로 문의하십시오.overseas@foregene.com

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