선두

긴 비암호화 RNA인 lncRNA는 일반적으로 200-100000nt 사이인 200개 뉴클레오티드보다 긴 길이를 가진 비암호화 RNA입니다.lncRNA는 후생유전학적, 전사 및 전사 후 수준에서 유전자 발현을 조절하고 X 염색체 침묵화, 게놈 각인 및 염색질 변형, 전사 활성화, 전사 간섭, 핵 수송, 세포 주기 조절, 세포 분화 조절 및 용량 보상 효과(Dosage compensation effect) 및 기타 많은 중요한 조절 과정에 참여하며 인간 질병의 발생, 발달 및 예방과 밀접하게 관련되어 있으며 현재 생물 의학 분야에서 핫스팟 중 하나입니다.

01  LncRNA의 종류와 특징

lncRNA는 위의 그림과 같이 형성되는 소스에 따라 여러 유형으로 나뉩니다.다음과 같은 특징이 있습니다.

1. lncRNA는 일반적으로 더 길고 동적 발현과 분화 동안 다른 스플라이싱 방법을 사용합니다.
2. lncRNA는 코딩 유전자에 비해 일반적으로 발현 수준이 낮습니다.
3. 대부분의 lncRNA는 조직 분화 및 발달 과정에서 명백한 시간적 및 공간적 발현 특이성을 가지고 있습니다.
4. 종양 및 기타 질병에 특징적인 발현이 있습니다.
5. lncRNA의 세포내 위치는 다양하다
6. 시퀀스는 보존성이 낮지만 기능은 어느 정도 보존됩니다.

02 LncRNA 역전사에 대해 자주 묻는 질문

세포 내 lncRNA의 함량이 적고 길이가 길고 구조가 높기 때문에 이러한 RNA는 스템 루프 또는 헤어핀과 같은 복잡한 구조를 갖는 경우가 많으며 RT-qPCR은 역전사에 실패하거나 효율이 낮은 문제가 발생하기 쉽습니다.

03 LncRNA 역전사 솔루션

중심 규칙에서 RNA 바이러스가 자신의 역전사 효소를 사용하여 RNA를 주형으로 사용하여 DNA를 합성하는 과정을 역전사라고 합니다.RNA 바이러스 역전사 효소를 사용하여 시험관 내에서 cDNA 주형을 합성하는 과정을 역전사라고 합니다.역전사 시스템에 포함된 주요 요소: RNA 템플릿, 역전사 효소, 프라이머 및 기타 구성 요소.

1.RNA 템플릿

역전사에 대한 RNA 템플릿의 영향은 구조, 순도 및 무결성에 반영됩니다.추출된 RNA의 순도와 무결성이 높을수록 역전사 효율이 높아지고 후속 정량 결과가 더 정확해집니다.일반적으로 사용되는 RNA 추출 시약에 의해 정제된 RNA는 대부분의 역전사 효소에 대해 강력한 억제 효과를 갖는 알코올 및 구아니딘 염의 잔류물을 포함하는 경우가 많습니다.

2.역전사효소

역전사 효소는 전체 역전사 시스템에 중요한 영향을 미칩니다.대부분의 실험실에서 사용되는 역전사 효소의 적절한 온도는 일반적으로 42°C입니다.사실, 높은 수준의 RNA 구조를 열려면 더 높은 온도가 필요하고 역전사 효소에 대한 요구 사항이 더 높습니다.

3.뇌관

역전사 프라이머에는 유전자 특이적 프라이머, 랜덤 프라이머 및 Oligo dT 프라이머가 포함됩니다.대부분의 lncRNA는 polyA 꼬리를 포함하지 않으며, 무작위 프라이머를 Oligo dT와 적절하게 일치시키는 것이 중요합니다.

4. 기타 구성 요소

RNA는 특히 분해되기 쉽다는 점에서 역전사 시스템의 성분 도입을 최소화할 수 있으며, 이는 RNase의 진입을 효과적으로 방지하고 역전사의 원활한 진행을 보장할 수 있습니다.

F오레진RNA 템플릿에서 얻음, qPCR로 역전사

lncRNA 검출을 포괄적으로 에스코트

동물 총 RNA I위안키트(gDNA 제거 컬럼 포함)

세포 총 RNA I위안키트(gDNA 제거 컬럼 포함)

Lnc-RT Hero™ I(With gDNase)(lncRNA로부터 cDNA를 합성하기 위한 Super Premix)

Real Time PCR EasyTM-SYBR 그린 I

A장점 ofRNA 추출:

이 키트는 3세대 RNA 추출 기술을 사용하므로 DNase를 사용할 필요가 없습니다.

96, 24, 12, 6-well plate culture cell에서 11분만에 gDNA-free, 고순도, 고품질의 total cell RNA를 고효율로 추출합니다.

lncRNA 역전사의 장점:

게놈 DNA 오염을 빠르게 제거하기 위해 LncRNA용으로 특별히 개발된 역전사 시스템입니다.

역전사 시스템은 열 안정성이 높으며 50°C에서도 우수한 역전사 성능을 보입니다.

GC 함량이 높고 2차 구조가 복잡한 템플릿을 고효율로 역전할 수 있습니다.

장점of qPCR:

Hot start Foregene Taq Polymerase는 증폭 효율, 증폭 감도 및 증폭 특이성이 더 높습니다.

최적화된 Real PCR Easy Mix는 SYBR Green I의 검출 감도를 높이고 형광 강도가 유사 제품보다 3~5배 높아 다양한 유형의 형광 정량 실험 요구를 충족할 수 있습니다.