최근에 놀라운 사실을 발견했습니다!그 주변의 많은 고급 실험 전문가들은 아주 기본적인 실험 지식 포인트조차 모릅니다.

예를 들어 다음 질문에 답할 수 있습니까?

OD260과 A260 사이에 차이가 있습니까?각각은 무슨 뜻인가요?
OD는 광학 밀도(optical density)의 약자이고 A는 흡광도(absorbance)의 약자이며 두 개념은 실제로 동일합니다. "광학 밀도"는 "흡광도"이지만 "광학 밀도"는 대부분의 국가 표준과 일치하며 더 표준화되었습니다.

보통 핵산 농도를 계산하기 위해 260nm에서 OD 값을 측정하는데 1OD는 무엇을 의미합니까?
핵산은 260nm의 파장에서 최대 흡수 피크를 가지며, 여기에는 DNA와 RNA뿐만 아니라 조각난 핵산 조각(이것이 핵심)이 포함됩니다.
260 nm의 파장에서 측정된 OD 값을 OD260으로 기록하였다.샘플이 순수한 경우 OD260 값은 핵산 샘플의 농도를 계산할 수 있습니다.
1 OD260 = 50㎍/ml dsDNA(이중가닥 DNA)
=37 μg/ml ssDNA(단일 가닥 DNA)
=40μg/ml RNA
=30 μg/ml dNTP(올리고뉴클레오티드)
RT-PCR, Realtime-PCR 및 QPCR 간에 연결 및 차이점이 있습니까?
RT-PCR은 역전사 PCR의 약자입니다.
Real Time PCR=qPCR, Quantitative Real Time PCR의 약자
Real Time PCR(실시간 형광 정량 PCR) 및 Reverse Transcription PCR(역전사 PCR)은 모두 RT-PCR로 약칭되는 것 같습니다.그러나 국제 관례는 다음과 같습니다. RT-PCR은 구체적으로 역전사 PCR을 나타냅니다.

생물학에서 DNA/RNA의 길이를 설명하기 위해 일반적으로 사용되는 nt, bp 및 kb는 무엇입니까?
nt = 뉴클레오티드
bp = 염기쌍 염기쌍
kb = 킬로베이스

물론 많은 사람들이 이러한 작은 세부 사항에 관심이 없다고 말할 것입니다!모두가 이것을하고 아무도 그것이 무엇인지 묻지 않을 것입니다.이건 불필요한 거 아시죠?

아니, 아니, 아니, 이것을 아는 것이 매우 필요합니다!무엇 때문에?
당신이 기사를 게시하고 싶기 때문에!형제!졸업을 목표로 하든 과학 연구 성과를 추구하든 기사에 의존하여 말해야 합니다!

핵산 추출은 가장 간단하고 기본적인 실험이어야 합니다.핵산 추출의 품질은 후속 실험의 결과를 직접적으로 결정합니다.

여러 번 말했지만 여전히 신경 쓰지 않는 친구들이 많습니다.이번에는 기사에서 나가기로 했습니다!

MIQE라고 하는 정량적 실시간 PCR 실험 게시를 위한 최소 정보는 국제적으로 출시된 형광 정량 실험 가이드라인으로, 형광 정량 PCR 실험 평가 및 논문 게재에 필요한 최소한의 실험 정보 기준을 제시합니다.실험자가 제공한 실험 조건과 분석 방법을 통해 리뷰어는 연구자의 실험 계획의 타당성을 더 잘 평가할 수 있습니다.

핵산 추출 부분에서 다음과 같은 검출 항목이 제시된 것을 알 수 있으며,

"E"는 반드시 제공해야 하는 정보를 나타내고 "D"는 필요한 경우 제공해야 하는 정보를 나타냅니다.

양식은 매우 복잡합니다. 사실 누구나 처음부터 시작해야한다고 말하고 싶습니다.

순도(D), 수율(D), 무결성(E) 및 일관성(E)을 사용하여 이 네 가지 측면에서 핵산을 평가합니다.

실험 습관에 따라 순도와 농도의 평가 방법에 대해 먼저 이야기하십시오.

OD 측정은 실험자들이 선호하는 가장 쉬운 검출 방법입니다.원칙에 관해서는 여기서 자세히 설명하지 않겠습니다.현재 많은 실험실에서 초미세 분광광도계를 사용하여 핵산 샘플을 직접 정량 분석합니다.흡광도 값을 표시하면서 프로그램은 농도 값(핵산, 단백질 및 형광 염료) 및 관련 비율을 직접 제공합니다.OD 값의 분석은 이 사진을 저장하면 괜찮을 것입니다.

범용 OD 값 솔루션 목록

그러나 별도로 안내해야 할 몇 가지 주의 사항이 있습니다.

(결국, 당신이 필요할 때까지 저축하고 기다리는 사람임에 틀림없다는 것을 압니다!)

참고 1 장비

OD 값은 다른 장비의 영향을 받습니다.OD260이 일정 범위 내에 있는 한 OD230과 OD280의 값은 의미가 있습니다.예를 들어 일반적인 Eppendorf D30의 흡광도 범위는 260nm에서 0~3A이고 Thermo의 NanoDrop One은 260nm입니다.0.5~62.5A의 흡광도 범위.

노트 2희석 시약

OD 값은 다른 시약의 희석에 의해 영향을 받을 수 있습니다.예를 들어, pH에서 정제된 RNA의 OD260/280 판독값7.5 10mM 트리스버퍼는 1.9-2.1 사이이고중성 수용액비율은 더 낮을 것이고 아마도 1.8-2.0에 불과할 것입니다. 그러나 이것이 RNA의 품질이 차이를 변화시킨다는 것을 의미하지는 않습니다.

노트 3잔류 물질

잔류 물질의 존재는 핵산 농도 측정의 정확도에 영향을 미치므로 핵산 샘플에서 단백질, 페놀, 다당류 및 폴리페놀 잔류물을 가능한 한 피해야 합니다.

그러나 사실 유기시약을 이용한 추출은 오래된 방법이다.시판 키트에서는 원심분리와 결합된 실리카 기반 흡착 컬럼을 통해 추출 효과를 얻을 수 있어 제거가 어려운 독성 및 유해 유기 시약 등을 피할 수 있다.포레진의 핵산추출키트는 DNase/RNase 및 독성유기시약을 사용하지 않아 빠르고 안전합니다., 그리고효과는좋은(우연히 대머리라고 했는데 알고싶은거 다 알아요).

실시예 1: Genomic DNA 추출 수율 및 순도

Foregene Soil DNA Isolation Kit(DE-05511)는 다양한 출처의 토양 샘플을 처리하며, 얻은 genomic DNA의 양과 순도는 다음 표에 나와 있습니다.
실시예 2: Tissue RNA 추출 수율 및 순도

Animal Total RNA Isolation Kit(RE-03012)는 다양한 조직 샘플을 처리하여 얻은 RNA의 양과 순도를 아래 표에 나타내었습니다(마우스 조직의 경우).
그러나 OD 값이 끝났다고 생각하지 마십시오.제가 앞에 그려드린 키포인트들 신경쓰이시나요?

알아채다

단편화된 핵산 분자도 흡광도에서 계산됩니다.RNA에 게놈 DNA 잔기가 있다고 가정하면 OD 값이 매우 높게 나타나지만 실제 RNA 농도를 결정할 수는 없습니다.귀하의 RNA가 분해되었는지 여부가 명확하지 않기 때문에 보다 정확한 판단을 내리기 위한 종합적인 평가 방법, 즉 MIQE에서 언급한 핵산 무결성 평가가 여전히 필요합니다.