핵산 검사 실험실의 PCR 방법과 핵산 에어로졸 오염은 동전의 양면과 같습니다.우리는 그것을 가질지 말지 선택할 수 있을 뿐, 그것을 원하거나 소비할지는 선택할 수 없습니다.
1. DNA 제거제 스크리닝
핵산 에어로졸 오염의 공간적 제거를 위해서는 먼저 액체 상태의 핵산을 제거할 수 있는 DNA 제거제를 스크리닝해야 합니다.실제로 작동하는 DNA 제거제가 많지 않기 때문입니다.실험 방법은 다음을 참조하십시오. DNA 제거기는 실험실의 "비밀 코너"가 될 수 없습니다!
본 실험에서는 디지털 PCR로 정량된 ASFV plasmid와 DNA remover를 100 copies/μL(CT 약 31)로 동량 혼합한 후 실온에서 각각 10분, 20분, 30분 동안 반응시켰다.핵산 추출 후 qPCR 증폭을 수행하였다.플라스미드와 물이 혼합된 양성 대조군을 비교하였다.실험이 동시에 완료되지 않았기 때문에 결과 간에 일정한 편차가 있을 수 있지만 실험의 결론에는 영향을 미치지 않습니다.지금까지 10개의 상업용 DNA 리무버 제품을 평가했습니다.1호, 6호, 8호 제품만이 액체 상태의 플라스미드 DNA를 효과적으로 분해할 수 있습니다.다른 제품은 거의 효과가 없습니다.
표 1 시판 DNA 제거제의 핵산 제거 효과
2. 일반적으로 사용되는 소독제의 DNA 제거 효과 실험
1. 일반적으로 사용되는 소독제의 스크리닝
실험실에서 일반적으로 사용되는 소독제에는 알데히드, 페놀, 알코올, 4차 암모늄염, 과산화물, 염소 제제, 산 및 염기 등 여러 유형이 있습니다.이러한 소독제의 미생물에 대한 소독효과는 실험으로 충분히 검증되었으나 핵산의 분해효과에 대한 실험자료는 충분하지 않다.핵산 검사실은 미생물에 대한 소독 효과가 좋을 뿐만 아니라 DNA를 분해할 수 있는 소독제가 필요합니다.테스트 결과 84 소독제와 트리클로로이소시아누르산 및 1M 염산의 두 가지 염소 제제만이 요구 사항을 충족하는 것으로 나타났습니다.1M 염산은 부식성이 높기 때문에 핵산 검사 실험실에서 폐기물 처리로 염소 제제를 사용하는 것이 좋습니다.그러나 염소 제제는 금속을 부식시키기 때문에 기구 및 장비의 소독에 사용할 수 없습니다.
표 2 소독제 종류별 DNA 제거 효과
2. 염소 제제의 최소 유효 농도
염소계 소독제는 강한 DNA 분해 효과가 있지만 금속 부식성과 자극성으로 인해 바닥, 비금속 조리대, 침지 팁, 원심 분리기 튜브 및 기타 테스트 항목을 청소하는 데 사용할 수 있습니다.
"신관상폐렴 전염병 소독 기술 지침"에 따르면 오염 물질(환자의 혈액, 분비물 및 구토물) 사용 가능한 염소 5g/L-10g/L 염소 함유 소독제;바닥, 벽, 물체 표면은 유효염소 1g/L 사용 염소 소독제: 의류, 침구류 및 기타 직물은 0.5g/L 유효염소가 함유된 염소 소독제에 30분 동안 담근 후 평소와 같이 세척합니다.
표 3 염소계 살균제 농도별 DNA 제거 효과
테스트 결과에 따르면 유효 염소 농도가 1.2g/L 이상인 경우 염소 함유 소독제는 5분 동안 사용하면 100 copies/μL 플라스미드를 완전히 분해할 수 있습니다.10분 동안 작용할 때 유효 염소 농도가 0.6g/L 이상인 84 소독제는 100copy/μL의 플라스미드를 완전히 분해할 수 있습니다.
3. 핵산 에어로졸에 의한 오염된 공기 제거 실험
핵산 에어로졸로 오염된 공기를 정화하는 방법은?에어로졸로 오염된 환경을 조성한 후 이를 청소하거나 오염 후 핵산을 청소하려는 생각이 대부분이다.저에게는 반복할 수 없는 실험과 그 실험의 결과를 정량적으로 분석할 수 없는 무의미한 일이기에 살균 공기 소독 방법을 몇 가지 빌려왔습니다."GB27948-2020 공기 소독제 일반 요구 사항" 및 "소독 기술 사양" 참조
1. 시험재료
1.1 DNA 제거제: 본 실험에서는 시판되는 표 1의 DNA 제거제 6번과 8번 두 가지를 선택하였다.
1.2 테스트 플라스미드: 대부분의 실험실 오염의 CT 값이 30보다 높을 것이라는 점을 고려할 때 이번에 사용된 ASFV 유전자 플라스미드의 농도는 약 100 copies/μL이며 형광 정량 PCR CT는 약 31.07입니다.무리를 짓는 면봉에 플라스미드를 넣고 공기 중에서 건조시킵니다.
1.3 테스트 기기: Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd.에서 친절하게 지원하는 Bilingkehan KVBOX 소독 기기는 과산화수소 소독제로 공기 소독 성능이 우수하며 포자 및 기타 미생물을 효과적으로 죽일 수 있습니다.
1.4 시험 공간: 약 0.1 입방미터의 폐쇄된 이송 창.
2. 시험방법
소독기에 설정된 소독제의 양은 10ml이고 농도는 100ml/m3로 "GB27948-2020 공기 소독제 일반 요구 사항"보다 훨씬 높습니다. 에어로졸 스프레이 소독을 사용할 때 소독제의 양은 ≤10ml/m3이어야 합니다.
분무 후 2시간 동안 밀봉한 후 플라스미드가 부착된 면봉을 TE로 용출하고, 훈증 처리하지 않은 플라스미드가 부착된 면봉을 대조군으로 하였다.검출을 위해 형광 정량적 PCR 방법을 사용합니다.
표 4 공기 핵산 제거 시험 결과
3. 테스트 결과
액체 상태의 플라스미드를 효과적으로 분해할 수 있는 두 종류의 DNA 제거제는 공기 핵산 제거 실험에서 전혀 효과가 없었다.핵산 검사실에서 발생하는 핵산 에어로졸 오염 문제를 완벽하게 해결하기 위해 공기 중의 핵산 에어로졸 오염을 제거할 수 있는 솔루션을 찾길 바라지만 당분간 그런 제품은 발견되지 않았다.미래에는 공기 중의 핵산 제거에 사용할 수 있는 고성능 핵산 제거제가 나오리라 믿습니다.
4. 환상을 버리고 예방에 집중하라
회사에서 아무리 핵산제거 제품을 자랑한다 해도 핵산검사를 하는 친구들은 대부분의 착각을 버리고 현실을 인정할 것을 제안합니다.
게시 시간: 2021년 9월 10일
