접착제 회수 개선을 위한 팁

1. 전기영동 동안 샘플 로드를 늘립니다.

2. 새로 준비한 전기영동 버퍼를 사용합니다.

3. 접착제를 절단할 때 접착제 절단의 양을 줄이기 위해 스트립이 있는 접착제만 절단하려고 합니다. 목적 조각이 적은 접착제가 필요하지 않습니다. 그렇지 않으면 복구 속도에 영향을 미칩니다.

4. 두 개 이상의 접착제를 녹인 후 부피가 아무리 크더라도 튜브를 사용하여 동일한 컬럼으로 옮깁니다.

5. 졸에 첨가되는 용액은 DNA가 막에 결합하는 데 더 도움이 되는 조금 더 할 수 있지만 일반적으로 750ul를 초과하지 않습니다.

6. 겔 회수의 핵심은 컬럼 내 용액의 염농도, 산도(전하), 소수성을 통해 DNA를 컬럼에 결합시키는 것이다.따라서 전기영동 버퍼의 pH가 너무 높으면 10ul(pH 5.0, 3mol/L NaAC)를 졸에 첨가할 수 있습니다.막에서 DNA 분자를 더 잘 가로채기 위해 접착제를 녹인 후 30% 이소프로판올을 추가하여 액체에 가열할 수 있습니다.

7. 용리액을 추가하기 전에 몇 분(약 10분) 동안 컬럼을 실온에 두어 에탄올을 완전히 증발시킵니다.

8. 마지막으로 용리액을 적게 추가하여 회수량을 최소화합니다.일반적으로 30-50μl 용리액이 용출에 사용됩니다(너무 적지 않으면 용출에 도움이 되지 않는 멤브레인을 적실 수 없습니다).용출 액적은 막의 중앙에 있어 막에 결합된 DNA를 완전히 용출합니다.

9. 용출액을 첨가한 후 55도 수조에서 5분 동안 용출하거나 50도 수조에서 10분 이상 두거나 4도에서 밤새 파라필름으로 밀봉한 다음 원심분리하여 다음날 회수하면 효과가 좋습니다.

10.원심분리된 용출액을 다시 흡착탑에 넣고 다시 원심분리한다.

PCR 산물 회수를 위한 자세한 방법 및 절차

1. 일반 고무 재활용

접착제를 회수하고 싶다면 편리하고 회수율이 약간 더 높은 키트를 사용하는 것이 가장 좋습니다.정말 수동으로 복구해야 하는 경우 접착제를 절단한 후 TE 볼륨의 3배를 추가할 수 있습니다.수조에서 녹인 후 페놀, 페놀/클로로포름을 깨끗하게 추출하고 에탄올을 침전시킨다.그게 다야.

2. 저융점 겔에서 DNA 회수

DNA 절편 정제 TE(10mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1mmol/l EDTA)를 gel 부피만큼 첨가하고 65°C water bath에서 5분 동안 gel을 완전히 녹인다.

실온이 된 후, 동량의 페놀(TE로 포화, TE는 상층에 밀봉하고, 하층의 페놀은 제거함)을 첨가하고, 혼합물을 부드럽게 혼합하고(혼합 불필요), 12,000rpm에서 3분 동안 원심분리하였다.1~2회 반복합니다.

상등액을 취하고 0.1 부피의 3mol/L 아세트산나트륨(pH 5.2)과 2.5배 부피의 무수 에탄올을 첨가하여 에탄올 침전을 수행한다.정제된 DNA를 적당량의 TE로 녹여 내용물을 측정한 후 사용준비(표적 유전자 구조 분석, 프로브 제작 등에 사용 가능).

3. 증폭 특이성이 좋은 PCR 회수율

PCR 증폭의 특이도가 좋으면 PCR 산물의 단순 정제 및 회수에 불과합니다.PCR 산물에 50ug/ml proteinase K를 넣고 1시간 동안 37도에서 페놀/클로로포름으로 1회 추출하고 클로로포름으로 1회 추출하고 상등액 0.1 부피를 추가할 수 있습니다.2.5 부피의 무수 에탄올로 침전시켜 아세트산나트륨을 회수하였다.

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