A260/A230의 낮은 비율은 일반적으로 230nm에서 최대 흡수 파장을 갖는 불순물에 의해 발생합니다.이러한 불순물이 무엇을 포함하는지 봅시다:

• 일반적인 오염 물질	흡수 파장	비율 효과
  단백질	~230nm 및 280nm	A의 동시 감소260/A 280그리고 A260/A 280비율
  구아니딘염	220-240nm	A를 줄입니다260/A 280비율
  페놀	~270nm	-
  트리졸	~230nm 및 270nm	A를 줄입니다260/A 280비율
  EDTA	~230nm	A를 줄입니다260/A 280비율
  에탄올	230-240nm	A를 줄입니다260/A 280비율

 
 
 
일반 오염 물질의 흡수 파장 및 대비 값

P단백질 오염
단백질 오염은 핵산 추출 과정에서 가장 흔한 오염으로 볼 수 있습니다.단백질은 상부 수상과 하부 수상 사이에 존재합니다.본질적인단계 .오염은 A260/A280과 A260/A230의 비율을 동시에 감소시킬 것이며 A260/A230의 비율은 A260/A280의 비율보다 더 뚜렷하게 변할 것입니다.
이후에역전사or qPCR 반응, 단백질 잔류물은 효소 기능을 억제하거나 방해할 수 있습니다..단백질 오염을 피하는 가장 좋은 방법은 상층액을 흡인할 때 “많이보다는 적게, 여러 번”의 원칙을 염두에 두는 것입니다.

2. 구아니디늄 오염
염산염(GuHCl)과 구아니딘 티오시안산염(GTC)은 단백질을 변성시키는 효과가 있어 핵산 추출 과정에서 세포막을 빠르게 파괴해 단백질 변성 및 침전을 일으킬 수 있다.GuHCl과 GTC의 흡수 파장은 220~240nm이며,잔류 구아니디늄 염은 A260/A230의 비율을 감소시킵니다..잔류 구아니디늄 염이 비율을 감소시키지만,다운스트림 실험에 미치는 영향은 실제로 무시할 수 있습니다..

3. 트리졸 오염
Trizol의 주성분은 페놀입니다.페놀의 주요 기능은 세포를 용해시키고 세포 내 단백질 및 핵산 물질을 방출하는 것입니다.페놀은 효과적으로 단백질을 변성시킬 수 있지만 RNase 활성을 완전히 억제할 수는 없습니다.따라서 TRIzol에 8-hydroxyquinoline, guanidine isothiocyanate, β-mercaptoethanol 등을 첨가하여 내인성 및 외인성 RNase를 억제한다.
세포 RNA를 추출할 때 Trizol은 세포를 빠르게 용해시켜 세포에서 방출되는 뉴클레아제를 억제할 수 있으며, 잔류 Trizol은 A260/A230의 비율을 크게 감소시킵니다.
처리 방법: 원심 분리 시 Trizol의 페놀은 4° 및 실온 조건에서 수상에 쉽게 용해된다는 점에 유의해야 합니다.

4. 에탄올 잔류물
에탄올은 DNA에 결합할 수 있는 염 이온을 용해시키면서 DNA를 침전시키기 위해 최종 공정에서 사용됩니다.가장 높은 흡수 파장흡수 피크에탄올도 230~240nm에 있으며,A260/A230의 비율도 줄어듭니다..
에탄올 잔류물을 피하는 방법은 최종 용출 동안 두 번 반복할 수 있습니다.흄 후드elution을 위한 완충액을 추가하기 전에 에탄올이 완전히 증발하도록 2분 동안 두십시오.
그러나 상기 비율은 RNA 품질의 평가 지표일 뿐임을 알아야 한다.위에서 언급한 작업을 엄격하게 규제하면 비율과 표준 범위의 편차가 후속 실험에 큰 영향을 미치지 않습니다.
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