(96-웰) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR 키트 – SYBR Green I
설명
그만큼(96-웰) QuickEasyTM 셀 다이렉트 RT-qPCR 키트–SYBR 그린I제공합니다고유한 용해 버퍼 시스템to 빠르게 RNA 방출배양세포에서RT-qPCR 반응을 위한 샘플, 시간 소모적이고 힘든 작업 제거RNA 정제 과정을 거치며 필요한 RNA 템플릿을 얻는 데 7분밖에 걸리지 않습니다.그만큼5× 다이렉트 RT 믹스그리고2× 직접 qPCR 믹스-SYBR상자에 제공된실시간 정량을 효과적으로 얻습니다.PCR 결과.
5× Direct RT Mix 및 2× Direct qPCR Mix-SYBR은 강한 inhibitor tolerance를 가지며 효율적인 역전사 및 특이 증폭을 위한 주형으로 테스트할 샘플의 lysate를 사용할 수 있습니다.시약에는 RNA에 대한 친화력이 높은 Foregene 고유의 역전사 효소와 Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl이 포함되어 있습니다.2 , 반응 완충액, PCR 최적화 및 안정제 , lysis 완충액과 함께 사용하여 빠르고 쉽고 정확하게 시료를 검출할 수 있으며 고감도, 강한 특이성 및 우수한 안정성의 특성을 가지고 있습니다.
이 키트는 96-웰 배양 세포의 마이크로 시스템 용해를 목표로 하며 균일성과 일관성이 우수합니다.Kit 구성품은 96개의 lysis reaction, 96개의 reverse transcription reaction, 96×2 qPCR reaction을 제공하여 96-well cell plate를 한번에 충족시킬 수 있어 시약의 반복적인 개봉, 동결, 해동으로 인한 오염과 시약 성능 저하를 방지할 수 있습니다.
키트 구성품
| 키트 구성 ( 50 μL 용해 시스템/20μLRT 반응계 /20μL qPCR 반응 시스템) | DRT-03011 | 주목 | |
| 96T | |||
| 부분I | 완충기CL | 5mL | 셀용해 |
| 포진프로테아제 플러스 II | 100 μL | ||
| 완충기ST | 500 μL | ||
| 부분 II | DNA지우개 | 100 μL | |
| 5× 다이렉트 RT 믹스 | 400 μL | RT | |
| 2× 직접 qPCR 믹스-SYBR | 1mL × 2 | 정량 PCR | |
| 50× ROX 참조 염료 | 400µL | ||
| RNase- 무료ddH2 O | 1.7mL |
| |
| M항문 | 1 조각 | 1인분 | |
*: 용해 시약 DNA Eraser는 키트의 파트 II에 포함되어 있습니다.Cell Lysis, RT 및 qPCR 구성 요소는 별도로 구입할 수 있습니다.
기능 및 장점
■간단하고 효과적입니다. Cell Direct RT 기술을 사용하면 단 7분 만에 RNA 샘플을 얻을 수 있습니다.
■ 샘플 수요가 적고 10개 셀까지만 테스트할 수 있습니다.
■ 높은 처리량: 384, 96, 24, 12, 6웰 플레이트에서 배양된 세포에서 RNA를 빠르게 검출할 수 있습니다.
■ DNA Eraser는 방출된 게놈을 신속하게 제거하여 후속 실험 결과에 미치는 영향을 크게 줄입니다.
■ 최적화된 RT 및 qPCR 시스템은 2단계 RT-PCR 역전사를 보다 효율적으로 만들고 PCR을 보다 특이적으로 만들고 RT-qPCR 반응 억제제에 대한 저항성을 높입니다.
키트 적용
적용 범위: 배양 세포.
- 샘플 용해에 의해 방출된 RNA: 이 키트의 RT-qPCR 템플릿에만 적용됩니다.
- 본 키트는 유전자 발현 분석, siRNA 매개 유전자 침묵 효과 검증, 약물 스크리닝 등의 용도로 사용할 수 있습니다.
보관 및 유효 기간
이 키트의 파트 I은 4에 보관해야 합니다.℃;Part II는 -20℃에서 보관해야 합니다.
Foregene Protease Plus II는 4℃에서 보관해야 합니다.℃, -20℃에서 동결하지 마십시오.
시약 2×Direct qPCR Mix-Taqman은 -20에 보관해야 합니다.℃어두운 데에서;자주 사용하면 4시에 보관할 수도 있습니다.단기 보관의 경우 ℃(10일 이내 소진).
Real Time PCR 프라이머 설계 원리
정방향 프라이머 및 역방향 프라이머
Real Time PCR을 위해서는 프라이머 디자인이 매우 중요합니다.프라이머는 PCR 증폭의 특이성 및 효율성과 관련이 있으며 다음 원칙을 참조하여 설계할 수 있습니다.
- 프라이머 길이: 18-30bp.
- GC 함량: 40-60%.
- Tm 값: Primer 5와 같은 프라이머 디자인 소프트웨어는 프라이머의 Tm 값을 제공할 수 있습니다.업스트림 및 다운스트림 프라이머의 Tm 값은 가능한 한 가까워야 합니다.Tm 계산 공식도 사용할 수 있습니다. Tm = 4°C(G + C) + 2°C(A + T).PCR을 수행할 때 일반적으로 5°C의 프라이머 Tm 값 미만의 온도를 어닐링 온도로 선택합니다(어닐링 온도의 해당 증가는 PCR 반응의 특이성을 증가시킬 수 있음).
- 프라이머 및 PCR 제품:
- 디자인 프라이머 PCR 증폭 산물 길이는 바람직하게는 100-150bp이다.
- 템플릿의 2차 구조 영역에 있는 디자인 프라이머는 가능한 한 피해야 합니다.
- 업스트림 및 다운스트림 프라이머의 3' 말단 사이에 2개 이상의 상보적인 염기가 형성되지 않도록 하십시오.
- 프라이머 3' 말단 염기는 3개의 추가 연속 G 또는 C와 함께 존재할 수 없습니다.
- 프라이머 자체는 상보적인 구조를 가질 수 없으며 그렇지 않으면 헤어핀 구조가 형성되어 PCR 증폭에 영향을 미칩니다.
- ATCG는 프라이머 서열에 가능한 한 고르게 분포되어야 하며, 3' 말단 염기는 T로 피해야 합니다.
부록1：C엘다이렉트RT-정량 PCR 키트 구성품t 보충 팩
1.세포용해액
| 세포 용해 솔루션 | |||
| 키트 구성품 (24웰 용해 시스템/웰) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100T | 500T | ||
| 부분나 | 버퍼 CL | 20ml | 100ml |
| Foregene 프로테아제 플러스 II | 400μl | 1ml × 2 | |
| 버퍼 ST | 1ml × 2 | 10ml | |
| 부분II | DNA 지우개 | 400μl | 1ml × 2 |
| RT 믹스 | |
| 키트 구성품 (20μl 반응 시스템) | DRT-01011-B1 |
| 200T | |
| 5× 다이렉트 RT 믹스 | 800μl |
| RNase 프리 ddH2O | 1.7ml × 2 |
| qPCR 믹스 | ||
| 키트 구성품 (20μl 반응 시스템) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200T | 1000T | |
| 2× 직접 qPCR Mix-Taqman | 1ml × 2 | 1.7ml × 6 |
| 20× ROX 참조 염료 | 40μl | 200μl |
| RNase 프리 ddH2O | 1.7ml | 10ml |
사용 설명서:
