Cell Direct RT qPCR 키트—SYBR GREEN I Direct Cell Lysis Cell Ready 원스텝 qRT-PCR 키트
설명
이 키트는 RT-qPCR 반응을 위해 배양된 세포 샘플에서 RNA를 빠르게 방출할 수 있는 고유한 용해 버퍼 시스템을 사용하므로 시간이 많이 걸리고 힘든 RNA 정제 프로세스가 필요하지 않습니다.단 7분만에 RNA 템플릿을 얻을 수 있습니다.5×다이렉트 RT 믹스 및 2×키트에서 제공하는 Direct qPCR Mix-SYBR 시약은 실시간 정량 PCR 결과를 빠르고 효과적으로 얻을 수 있습니다.
5×다이렉트 RT 믹스 및 2×Direct qPCR Mix-SYBR은 강력한 inhibitor tolerance를 가지고 있으며 샘플의 lysate를 RT-qPCR의 템플릿으로 직접 사용할 수 있습니다.이 키트에는 고유한 RNA 고친화성 Foregene 역전사효소와 Hot D-Taq DNA 중합효소, dNTPs, MgCl이 포함되어 있습니다.2, 반응 버퍼, PCR 최적화 및 안정제.
명세서
200×20μ리터 수신, 1000×20μl 수신
키트 구성품
| 1부 | 버퍼 CL |
| Foregene 프로테아제 플러스 II | |
| 버퍼 ST | |
| 파트 II | DNA 지우개 |
| 5× 다이렉트 RT 믹스 | |
| 2× 직접 qPCR 믹스-SYBR | |
| 50× ROX 참조 염료 | |
| RNase 프리 ddH2O | |
| 지침 | |
기능 및 장점
■간단하고 효과적입니다. Cell Direct RT 기술을 사용하면 단 7분 만에 RNA 샘플을 얻을 수 있습니다.
■ 샘플 수요가 적고 10개 셀까지만 테스트할 수 있습니다.
■ 높은 처리량: 384, 96, 24, 12, 6웰 플레이트에서 배양된 세포에서 RNA를 빠르게 검출할 수 있습니다.
■ DNA Eraser는 방출된 게놈을 신속하게 제거하여 후속 실험 결과에 미치는 영향을 크게 줄입니다.
■ 최적화된 RT 및 qPCR 시스템은 2단계 RT-PCR 역전사를 보다 효율적으로 만들고 PCR을 보다 특이적으로 만들고 RT-qPCR 반응 억제제에 대한 저항성을 높입니다.
키트 적용
적용 범위: 배양 세포.
- 샘플 용해에 의해 방출된 RNA: 이 키트의 RT-qPCR 템플릿에만 적용됩니다.
- 본 키트는 유전자 발현 분석, siRNA 매개 유전자 침묵 효과 검증, 약물 스크리닝 등의 용도로 사용할 수 있습니다.
도표
보관 및 유효 기간
이 키트의 Part I은 4℃에서 보관해야 합니다.Part II는 -20℃에서 보관해야 합니다.
Foregene Protease Plus II는 4℃에서 보관해야 합니다.℃, -20℃에서 동결하지 마십시오.
시약 2×Direct qPCR Mix-SYBR은 -20에 저장해야 합니다.℃어두운 데에서;자주 사용하면 4시에 보관할 수도 있습니다.단기 보관의 경우 ℃(10일 이내 소진).
Real Time PCR 프라이머 설계 원리
정방향 프라이머 및 역방향 프라이머
Real Time PCR을 위해서는 프라이머 디자인이 매우 중요합니다.프라이머는 PCR 증폭의 특이성 및 효율성과 관련이 있으며 다음 원칙을 참조하여 설계할 수 있습니다.
프라이머 길이: 18-30bp.
GC 함량: 40-60%.
Tm 값: Primer 5와 같은 프라이머 디자인 소프트웨어는 프라이머의 Tm 값을 제공할 수 있습니다.업스트림 및 다운스트림 프라이머의 Tm 값은 가능한 한 가까워야 합니다.Tm 계산 공식도 사용할 수 있습니다. Tm = 4°C(G + C) + 2°C(A + T).PCR을 수행할 때 일반적으로 5°C의 프라이머 Tm 값 미만의 온도를 어닐링 온도로 선택합니다(어닐링 온도의 해당 증가는 PCR 반응의 특이성을 증가시킬 수 있음).
프라이머 및 PCR 제품:
디자인 프라이머 PCR 증폭 산물 길이는 바람직하게는 100-150bp이다.
템플릿의 2차 구조 영역에 있는 디자인 프라이머는 가능한 한 피해야 합니다.
업스트림 및 다운스트림 프라이머의 3' 말단 사이에 2개 이상의 상보적인 염기가 형성되지 않도록 하십시오.
프라이머 3' 말단 염기는 3개의 추가 연속 G 또는 C와 함께 존재할 수 없습니다.
프라이머 자체는 상보적인 구조를 가질 수 없으며 그렇지 않으면 헤어핀 구조가 형성되어 PCR 증폭에 영향을 미칩니다.
ATCG는 프라이머 서열에 가능한 한 고르게 분포되어야 하며, 3' 말단 염기는 T로 피해야 합니다.
부록 1：Cell Direct RT-qPCR Kit 구성품 보충 팩
1.세포 용해 솔루션
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| 키트 구성품 (24웰 용해 시스템/웰) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100T | 500T | ||
| 부분나 | 버퍼 CL | 20ml | 100ml |
| Foregene 프로테아제 플러스 II | 400μl | 1ml × 2 | |
| 버퍼 ST | 1ml × 2 | 10ml | |
| 부분II | DNA 지우개 | 400μl | 1ml × 2 |
2.RT 믹스
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| 키트 구성품 (20μl 반응 시스템) | DRT-01011-B1 |
| 200T | |
| 5× 다이렉트 RT 믹스 | 800μl |
| RNase 프리 ddH2O | 1.7ml × 2 |
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| ||
| 키트 구성품 (20μl 반응 시스템) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200T | 1000T | |
| 2× 직접 qPCR 믹스-SYBR | 1ml × 2 | 1.7ml × 6 |
| 50× ROX 참조 염료 | 40μl | 200μl |
| RNase 프리 ddH2O | 1.7ml | 10ml |
사용 설명서:
