대장균 O157:H7 핵산 검출 키트(PCR 형광 프로브법)
키트 설명:
고양이 번호FP102
식품, 사료, 물 시료 및 환경 시료에서 E. coli O157:H7의 신속한 검출 및 스크리닝에 사용됩니다.
설명
식품, 사료, 물 시료 및 환경 시료에서 E. coli O157:H7의 신속한 검출 및 스크리닝에 사용됩니다.
[시험원리]형광 PCR 기술의 원리에 따라 대장균 O157:H7의 특정 유전자에 대해 특정 프라이머 및 Taqman 프로브를 설계하고 형광 PCR 기기로 검출하여 대장균 O157:H7 DNA의 정성 검출을 실현합니다.
키트 내용물
참고: ROX 채널 프로브는 포함되어 있지 않습니다.
| C구성품 | 사양 | Q양 |
| 버퍼 A | 튜브 | 1 |
| 버퍼 B | 튜브 | 1 |
| 양성 대조군 | 튜브 | 1 |
| 네거티브 컨트롤 | 튜브 | 1 |
예상 사용량
그것은에 사용됩니다 식품, 사료, 물 시료 및 환경 시료에서 E. coli O157:H7의 신속한 검출 및 스크리닝.
보관 조건 및 유효 기간
-20℃에서 어두운 곳에서 보관하고 반복적인 동결 및 해동을 피하십시오.
유효기간은 12생산일은 외부 포장에 표시되어 있습니다.
기기 및 소모품
형광 정량 PCR 기기, 피펫 건 및 매칭 팁, 볼텍스 쉐이커, 미니 원심분리기.
용법
1. 샘플 처리
1.1 샘플 유형: 이 키트는 대장균 O157:H7에 의해 오염된 것으로 의심되는 식품, 사료, 물 샘플 및 기타 샘플에 적합합니다.깊이 가공된 육류 제품, 음료 및 색소가 포함된 기타 물질의 경우 형광 신호 수집에 영향을 미치지 않도록 헹궈야 합니다.
1.2 샘플 처리: "GB 4789.10-2016 식품 안전 국가 표준 대장균 O157 식품 미생물 검사: H7 테스트"를 참조하여 대장균 O157: H7의 샘플 준비, 증균 배양 및 분리에 대해 설명합니다.
- N핵산 추출
1.5mL 원심분리기 튜브에 20mL의 농축 용액을 취하고 200μL의 미생물 용해물(추가 키트 필요)을 추가하고 30초 동안 vortex한 다음 잠시 원심분리하고 따로 보관합니다.
비고: lysate에서 핵산 추출은 10분 이내에 완료되어야 하며, 장기간 보관할 수 없습니다.
3. 핵산 증폭
3.1 형광 정량 PCR 장비를 켜서 사용합니다.
키트의 완충액 A와 완충액 B를 완전히 녹이고 잠시 원심분리합니다.18 μL 버퍼 A와 2 μL 버퍼 B를 각 PCR 반응 튜브에 추가합니다.그런 다음 음성 대조군, 추출된 핵산 및 양성 대조군 각각 5mL를 PCR 반응 튜브에 추가하고 튜브를 캡으로 덮고 잠시 원심분리합니다.
3.3 PCR 반응관을 형광 PCR 기계로 옮기고 다음과 같은 절차에 따라 증폭 실험을 수행한다. 반응 시스템은 25mL를 선택하고, 매 사이클마다 60°C에서 형광 신호를 수집하고, 검출 채널은 FAM을 선택한다.
| 단계 | 프로그램 | 사이클 수 |
| 1 | 37℃ 5분 | 1 |
| 2 | 9 5℃ 3분 | 1 |
| 3 | 95°C 15초 | 4 0 |
| 60℃ 30초(형광집광) |
문제 분석 가이드
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
RNA를 추출할 수 없거나 핵산의 수율이 낮음
일반적으로 회수 효율에 영향을 미치는 많은 요인이 있습니다. 예를 들어 샘플 RNA 함량, 작업 방법, 용출량 등이 있습니다.。
일반적인 원인 분석：
1. 운전 중 빙욕 또는 저온(4℃) 원심분리.
제안: 상온(15-25 °C) 작동, 절대 얼음 수조 및 저온 원심 분리기 사용 금지.
2. 샘플 보관이 부적절하거나 샘플 보관 기간이 너무 깁니다.
제안: 샘플을 -80 ° C에 보관하거나 액체 질소에 동결하고 반복적인 동결-해동 사용을 피하십시오.RNA 추출을 위해 새로 수집한 샘플을 사용하십시오.
3.불충분한 샘플 용해
권장 사항: 샘플과 작업 용액(Linear Acrylamide)이 완전히 혼합되었는지 확인하고 실온(15-25 °C)에서 10분 동안 배양하십시오.
4. 용리액이 잘못 추가되었습니다.
권장 사항: RNase-Free ddH2O가 정제 컬럼의 멤브레인 중간에 추가되었는지 확인하십시오.
5. 버퍼 viRW2의 무수 에탄올의 부적절한 부피
제안: 지침을 따르고 키트를 사용하기 전에 올바른 양의 무수 에탄올을 Buffer viRW2에 추가하고 잘 혼합하십시오.
6. 부적절한 샘플 사용.
제안: Buffer viRL 500μl당 샘플 200μl.과도한 시료량은 RNA 추출 속도를 감소시킵니다.
7.부적절한 용출량 또는 불완전한 용출.
제안: 정제 컬럼의 용리액 부피는 30-50μl입니다.용출 효과가 만족스럽지 않은 경우 예열된 RNase-Free ddH를 추가하는 것이 좋습니다.2O 및 5-10분과 같이 실온에 두는 시간 연장
8. 버퍼 viRW2에서 헹군 후 정제 컬럼에 에탄올 잔류물이 있습니다.
제안: Buffer viRW2에서 헹구고 빈 튜브 원심분리를 2분 동안 수행한 후에도 에탄올이 여전히 남아 있는 경우 정제 컬럼을 빈 튜브 원심분리 후 5분 동안 실온에 두어 남아 있는 에탄올을 완전히 제거할 수 있습니다.
정제된 RNA 분자의 분해
정제된 RNA의 품질은 샘플 보관, RNase 오염 및 작동과 같은 요인과 관련이 있습니다.
일반적인 원인 분석：
1. 수집된 샘플이 제때 저장되지 않았습니다.
제안: 샘플을 채취한 후 시간 내에 사용하지 않을 경우 즉시 -80℃ 또는 액체 질소에 보관하십시오.RNA 분자 추출을 위해 가능하면 갓 수집한 샘플을 사용하십시오.
2.채취된 시료는 동결과 해동을 반복하였다.
제안: 샘플 수집 및 보관 중에 반복적인 동결 및 해동(한 번 이상)을 피하십시오. 그렇지 않으면 핵산 수율이 감소합니다.
3. 수술실에 RNase를 도입하였거나 일회용 장갑, 마스크 등을 착용하지 않은 경우
제안: RNA 분자 추출 실험은 별도의 RNA 수술실에서 가장 잘 수행되며, 실험 전에 실험 테이블을 청소합니다.RNase 도입으로 인한 RNA 분해를 방지하기 위해 실험 중에 일회용 장갑과 마스크를 착용하십시오.
4. 시약은 사용 중 RNase에 의해 오염됩니다.
제안: 관련 실험을 위해 새로운 바이러스 RNA 분리 키트로 교체하십시오.
5.원심분리기 튜브, 피펫 팁 등의 RNase 오염. 제안: 원심분리기 튜브, 피펫 팁 및 피펫이 모두 RNase-Free인지 확인하십시오.
정제된 RNA 분자는 다운스트림 실험에 영향을 미쳤습니다.
정제 컬럼에 의해 정제된 RNA 분자는 역전사, 노던 블롯 등과 같은 너무 많은 염 이온 또는 단백질이 있는 경우 다운스트림 실험에 영향을 미칩니다.
1. 용출된 RNA 분자에 염 이온이 남아 있습니다.
권장 사항: 올바른 부피의 무수 에탄올이 Buffer viRW2에 추가되었는지 확인하고 작동 지침의 올바른 원심분리 속도에 따라 정제 컬럼을 두 번 세척합니다. 여전히 염 이온이 남아 있는 경우 Buffer viRW2를 정제 컬럼에 추가하고 실온에서 5분 동안 그대로 둘 수 있습니다.그런 다음 원심분리를 수행하여 염 이온 오염을 최대한 제거합니다.
2. 용출된 RNA 분자에 에탄올이 남아 있음
제안: 정제 컬럼이 Buffer viRW2로 헹구어졌는지 확인한 후 작동 지침의 원심 분리 속도에 따라 빈 튜브 원심 분리를 수행하십시오.에탄올이 남아있는 경우 빈 튜브 원심분리 후 상온에서 5분간 방치하면 남아있는 에탄올을 최대한 제거할 수 있다.
사용 설명서:
