Foreasy HS Taq DNA 중합효소
키트 설명:
◮높은 특이성: 높은 hot-start 활성을 가진 효소.
◮빠른 증폭: 10초/kb.
◮높은 템플릿 적응성 : 효율적으로 증폭하는 데 사용할 수 있습니다.GC값그리고증폭이 어려운 다양한 DNA 템플릿.
◮강한 충실도: 충실도는 6배입니다.of 일반 Taq 효소.
설명
Foreasy HS Taq DNA Polymerase는 유전자 재조합 기술에 의해 대장균 공학 박테리아에서 발현되는 새로운 Taq 효소입니다.효소를 특수한 공정으로 처리한 후's 활성은 열 활성화 전에 억제되어 저온 조건에서 프라이머 또는 프라이머 다이머의 비특이적 어닐링으로 인한 비특이적 증폭을 억제합니다.High specific PCR react에 적합한 제품입니다.이온, 다중 PCR , 높은 GC 함량( > 60% ) ,~와 함께2차 구조또는 기타강력한 배경 게놈ICS증폭 및 대규모 게놈ICS증폭 감지.상기 효소는 5' → 3' DNA 중합효소 활성 및 5' → 3' 엑소뉴클레아제 활성을 갖지만, 3' → 5' 엑소뉴클레아제 활성은 없다.
키트 구성품
| 요소 | IM-01021 | IM-01022 | IM-01023 |
| Foreasy HS Taq DNA 중합효소(5 U/μL) | 5000U(1mL) | 50KU(10mL) | 500KU(100mL) |
| 2× Taq 반응 버퍼 | 25mL ×5 | 250mL ×5 | 500mL × 25 |
기능 및 장점
- 높은 특이성: hot-start 활성이 높은 효소.
- 빠른 증폭: 10초/kb.
- 높은 템플릿 적응성 : High를 효율적으로 증폭하는 데 사용할 수 있습니다.GC값그리고증폭이 어려운 다양한 DNA 템플릿.
- 강한 충실도 : 충실도는 6배of 일반 Taq 효소.
키트 적용
- 다양한 PCR/qPCR System 및 direct PCR system
- PCR 증폭된 DNA 절편
- DNA 마크
- DNA 시퀀싱
- PCR 플러스 A 꼬리
활동 정의
1U : 10nmol의 효소를 도입하는데 필요한 효소량DNA주형/프라이머로 활성화된 연어 정자 DNA를 사용하여 산 불용성 물질로, 74°C, 30분.
반응 조건
| 온도 | 반응 시간 | 주기 시간 |
| 37°C | 5 분 | 1 |
| 94°C | 5 분 | 1 |
| 94°C | 10초 | 40 |
| 60°C | 10초 |
메모:10µL 및 20µL 시스템의 경우 열 순환기에 가열 덮개가 없으면 동일한 양의 미네랄 오일을 추가합니다.
PCR 반응 조건은 템플릿, 프라이머 등의 구조적 조건에 따라 달라진다.특정 작업에서는 template 종류, target fragment의 크기, 증폭된 fragment의 염기서열, primer의 GC 함량 및 길이 등의 특정 조건에 따라 annealing 온도, extension 시간 등 최적의 반응 조건을 설계하는 것이 필요합니다.
저장
-20 ± 5 °C에서 2년 또는 -80 °C에서 장기 보관.
증폭 신호 없음
1. 키트의 부적절한 보관 또는 만료로 인해 키트의 Taq DNA Polymerase가 활성을 잃습니다.
권장 사항: 키트의 보관 조건을 확인하십시오.적절한 양의 Taq DNA Polymerase를 PCR 시스템에 다시 추가하거나 관련 실험을 위해 새 Real Time PCR Kit를 구입하십시오.
2. DNA template에는 Taq DNA Polymerase의 inhibitor가 많이 존재합니다.
제안: 템플릿을 다시 정제하거나 사용되는 템플릿의 양을 줄이십시오.
3. Mg2+ 농도가 적당하지 않다.
권장사항: 당사에서 제공하는 2× Real PCR Mix의 Mg2+ 농도는 3.5mM입니다.그러나 일부 특수 프라이머 및 템플릿의 경우 Mg2+ 농도가 더 높을 수 있습니다.따라서 MgCl2를 직접 추가하여 Mg2+ 농도를 최적화할 수 있습니다.최적화를 위해 매번 Mg2+ 0.5mM을 증가시키는 것이 좋습니다.
4. PCR 증폭 조건이 적합하지 않고 프라이머 서열이나 농도가 부적절합니다.
제안: 프라이머 서열의 정확성과 프라이머가 분해되지 않았는지 확인하십시오.증폭 신호가 좋지 않으면 어닐링 온도를 낮추고 프라이머 농도를 적절하게 조정하십시오.
5.템플릿의 양이 너무 적거나 너무 많습니다.
권장 사항: 템플릿 선형화 기울기 희석을 수행하고 Real Time PCR 실험을 위해 최상의 PCR 효과가 있는 템플릿 농도를 선택합니다.
NTC의 형광 값이 너무 높습니다.
1. 작동 중 시약 오염 발생.
권장 사항: Real Time PCR 실험을 위해 새 시약으로 교체하십시오.
2. PCR 반응 시스템 준비 중 오염이 발생했습니다.
권장 사항: 라텍스 장갑 착용, 필터가 있는 피펫 팁 사용 등 작동 중에 필요한 보호 조치를 취하십시오.
3. 프라이머가 분해되고 프라이머의 분해로 인해 비특이적 증폭이 발생합니다.
제안: SDS-PAGE 전기영동을 사용하여 프라이머가 분해되었는지 여부를 감지하고 Real Time PCR 실험을 위해 새 프라이머로 교체하십시오.
프라이머 이량체 또는 비특이적 증폭
1. Mg2+ 농도가 적당하지 않다.
권장 사항: 당사에서 제공하는 2× Real PCR EasyTM Mix의 Mg2+ 농도는 3.5mM입니다.그러나 일부 특수 프라이머 및 템플릿의 경우 Mg2+ 농도가 더 높을 수 있습니다.따라서 MgCl2를 직접 추가하여 Mg2+ 농도를 최적화할 수 있습니다.최적화를 위해 매번 Mg2+ 0.5mM을 증가시키는 것이 좋습니다.
2. PCR annealing 온도가 너무 낮습니다.
제안: PCR annealing 온도를 매번 1℃ 또는 2℃씩 높입니다.
3. PCR product가 너무 길다.
권장 사항: Real Time PCR product의 길이는 100-150bp 사이여야 하며 500bp를 넘지 않아야 합니다.
4. 프라이머가 분해되고 프라이머의 분해로 인해 특정 증폭이 나타납니다.
제안: SDS-PAGE 전기영동을 사용하여 프라이머가 분해되었는지 여부를 감지하고 Real Time PCR 실험을 위해 새 프라이머로 교체하십시오.
5. PCR 시스템이 부적절하거나 시스템이 너무 작습니다.
제안: PCR 반응 시스템이 너무 작으면 검출 정확도가 떨어집니다.Real Time PCR 실험을 재실행하기 위해서는 정량적 PCR 장비에서 권장하는 반응 시스템을 사용하는 것이 가장 좋습니다.
정량 값의 불량한 반복성
1. 기기가 오작동합니다.
제안: 기기의 각 PCR 구멍 사이에 오류가 있어 온도 관리 또는 검출 시 재현성이 떨어질 수 있습니다.해당 악기의 지침에 따라 확인하십시오.
2. 샘플 순도가 좋지 않습니다.
권장 사항: 샘플이 불순하면 템플릿 및 프라이머의 순도를 포함하여 실험의 재현성이 저하됩니다.템플릿을 재정제하는 것이 가장 좋으며 프라이머는 SDS-PAGE로 가장 잘 정제됩니다.
3. PCR 시스템 준비 및 보관 시간이 너무 깁니다.
제안: 준비 직후 PCR 실험을 위해 Real Time PCR 시스템을 사용하고 너무 오래 방치하지 마십시오.
4. PCR 증폭 조건이 적합하지 않고 프라이머 서열이나 농도가 부적절합니다.
제안: 프라이머 서열의 정확성과 프라이머가 분해되지 않았는지 확인하십시오.증폭 신호가 좋지 않으면 어닐링 온도를 낮추고 프라이머 농도를 적절하게 조정하십시오.
5. PCR 시스템이 부적절하거나 시스템이 너무 작습니다.
제안: PCR 반응 시스템이 너무 작으면 검출 정확도가 떨어집니다.Real Time PCR 실험을 재실행하기 위해서는 정량적 PCR 장비에서 권장하는 반응 시스템을 사용하는 것이 가장 좋습니다.
