문제 분석 가이드

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

낮은 수율 또는 DNA 없음

일반적으로 시료의 출처, 시료의 연령, 시료의 보관 조건 및 작업을 포함하여 게놈 DNA의 수율에 영향을 미치는 많은 요인이 있습니다.

추출 시 genomic DNA를 얻을 수 없습니다.

1. 조직 샘플이 부적절하게 보관되거나 너무 오래 보관되어 게놈 DNA가 분해됩니다.

권장 사항: 조직 샘플을 액체 질소 또는 -20에 보관°씨;게놈 DNA 추출을 위해 새로 수집된 샘플을 사용하십시오.

2. 샘플 양이 너무 적으면 해당 genomic DNA가 추출되지 않을 수 있습니다.

제안: 장기간 보관되었거나 genomic DNA 분해가 심한 조직 샘플의 경우 상당한 genomic DNA를 추출하기 위해 조직 샘플의 양을 적절하게 증가시킬 수 있습니다.샘플의 양은 DNA 수요에 따라 결정될 수 있지만 신선한 샘플은 100mg을 초과하지 않아야 하며 건조 샘플은 30mg을 초과하지 않아야 합니다.

3. 샘플을 액체 질소로 분쇄하거나 액체 질소 후에 너무 오래 두지 않습니다.

제안: DNA 추출 중에 샘플을 액체 질소로 완전히 분쇄하여 세포벽을 깨뜨려야 합니다.그라인딩 후 샘플 분말을 65도로 예열된 PL1에 옮기십시오.°C 가능한 한 빨리 (분말이 녹으면 게놈 DNA가 빠르게 분해되기 시작합니다) .

4. Foregene Protease를 부적절하게 보관하면 활성이 감소하거나 비활성화됩니다.

권장 사항: Foregene Protease의 보관 조건을 확인하거나 효소 가수분해를 위한 새로운 Foregene Protease로 교체하십시오.

5. 키트를 부적절하게 보관하거나 너무 오래 보관하면 키트의 일부 구성 요소가 고장납니다.

권장 사항: 관련 작업을 위해 새로운 식물 게놈 DNA 추출 키트를 구입하십시오.

6. 키트의 부적절한 사용.

제안: 식물 게놈 DNA의 추출 및 정제를 위한 샘플 전용 식물 DNA 분리 키트를 구입하십시오.

7. 추가하지 않고 버퍼 WB무수 에탄올.

권장 사항: Buffer WB에 정확한 양의 무수 에탄올을 추가해야 합니다.

8. 용리액이 실리카 멤브레인에 제대로 적하되지 않았습니다.

제안: 65에서 예열된 용리액을 추가하십시오.℃실리카겔 멤브레인 중앙에 적가하고 상온에서 5분간 방치하여 용출 효율을 높입니다.

저수율 게놈 DNA를 얻기 위한 추출

1. 샘플이 부적절하게 보관되거나 너무 오래 보관되어 게놈 DNA가 분해됩니다.

권장 사항: 조직 샘플을 -20에 보관하십시오.℃;게놈 DNA 추출을 위해 새로 수집된 조직 샘플을 사용하십시오.

2. 조직 샘플의 양이 너무 적으면 추출되는 genomic DNA가 적어집니다.

제안: 일부 식물 샘플은 조류와 같은 수생 식물과 같이 물이 풍부하며, 복용량을 적절하게 늘리거나 물을 약간 탈수할 수 있습니다.

3. 샘플을 액체 질소로 완전히 분쇄하지 않았거나 분쇄 후 너무 오랫동안 실온에 두었습니다.

제안: 액체 질소 분쇄는 충분해야 하며 샘플 셀 벽은 가능한 많이 파괴되어야 합니다.분쇄 직후 시료 분말을 65°C로 옮겨야 합니다.℃다음 단계를 위해 예열된 버퍼 PL1.

4. 올바른 키트를 사용하지 않음.

권장 사항: 전용 식물 DNA 분리 키트를 사용하여 식물 게놈 DNA를 추출하고 정제하십시오.

5. Foregene Protease를 부적절하게 보관하면 활성이 감소하거나 비활성화됩니다.

권장 사항: Foregene Protease의 보관 조건을 확인하거나 효소 가수분해를 위한 새로운 Foregene Protease로 교체하십시오.

6. 용리액 문제

권장 사항: 용리에는 Buffer EB를 사용하십시오.ddH를 사용하는 경우₂O 또는 기타 용리액의 경우 용리액의 pH가 7.0-8.5인지 확인하십시오.

7. 용리액이 제대로 적하되지 않음

제안: Elution drop을 silica membrane 중앙에 넣고 상온에서 5분간 방치하면 용출 효율을 높일 수 있습니다.

8. 용리액의 양이 너무 적습니다.

제안: genomic DNA 용출용 용리액은 사용설명서에 따라 최소 100 이상 사용하십시오.μl.

저순도의 genomic DNA 추출

게놈 DNA의 순도가 낮으면 효소를 절단할 수 없고 PCR로 표적 유전자 단편을 얻을 수 없는 등 후속 실험의 실패 또는 열악한 효과를 초래할 수 있습니다.

1. 기타 단백질 오염, RNA 오염.

분석: 버퍼 PW는 컬럼 세척에 사용되지 않았습니다.버퍼 PW는 정확한 원심분리 속도로 컬럼을 세척하는 데 사용되지 않았습니다.

제안: 상층액이 컬럼을 통과할 때 상층액에 침전이 없는지 확인하십시오.지침에 따라 Buffer PW로 정제 컬럼을 세척해야 하며 이 단계는 생략할 수 없습니다.

2. 불순물 이온 오염.

분석: Buffer WB 세척 컬럼을 생략하거나 한 번만 세척하여 잔류 이온 오염을 초래했습니다.

권장 사항: 지침에 따라 Buffer WB로 두 번 세척하여 잔류 이온을 최대한 제거하십시오.

3. RNase 오염.

분석: 외인성 RNase가 버퍼에 추가됩니다.Buffer PW에서 잘못된 세척 작업은 잔류 RNase를 초래하고 시험관 내 전사와 같은 다운스트림 RNA 실험 작업에 영향을 미칩니다.

제안: Foregene 시리즈 핵산 추출 키트는 추가 RNase 없이 RNA를 제거할 수 있으며 Plant DNA Isolation Kit의 모든 시약은 RNase가 필요하지 않습니다.지침에 따라 Buffer PW로 정제 컬럼을 세척해야 하며 이 단계는 생략할 수 없습니다.

4. 에탄올 잔류물.

분석: Buffer WB로 정제 컬럼을 세척한 후 빈 튜브 원심분리를 수행하지 않았습니다.

권장 사항: 적절한 빈 튜브 원심 분리에 대한 지침을 따르십시오.

사용 설명서:

식물 DNA 분리 키트 사용 설명서