Real Time PCR Easyᵀᴹ-Taqman
키트 설명:
◮간편함 - 실험 오류 및 작업 시간을 줄이기 위한 2배 PCR Mix
◮특이적 - 최적화된 버퍼 및 핫 스타트 Taq 효소는 비특이적 증폭 및 프라이머 다이머 형성을 방지할 수 있습니다.
◮고감도 - 낮은 템플릿 사본 감지 가능
◮우수한 다용성 - 대부분의 실시간 정량 PCR 기기와 호환 가능
키트 설명
2X Real PCR EasyTMReal Time PCR Easy에서 제공하는 Mix-TaqmanTM-Taqman kit는 Real Time PCR 증폭 반응을 위해 특정 형광 프로브를 사용하는 새로운 premix 시스템으로 제품 특이성과 반응 민감도를 크게 향상시킬 수 있습니다.ROX는 내부 대조 염료로 제공됩니다.
2X Real PCR 이지TMMix-Taqman에는 Foregene의 고유한 hot-start Taq DNA Polymerase가 포함되어 있습니다.일반 Taq 효소와 비교하여 높은 증폭 효율, 강한 특이적 증폭 능력 및 낮은 미스매치율의 장점을 가지고 있습니다.비특이적 증폭을 줄이고 PCR의 정확도를 높일 수 있습니다.
명세서
| 실시간 PCR 간편TM-택맨 | ||||
| 키트 구성(20μl 시스템) | QP-01021 | QP-01022 | QP-01023 | QP-01024 |
| 200T | 500T | 1000T | 2000T | |
| 2배실제 PCR쉬운TM혼합-택맨 | 1ml ×2 | 1.7 ml ×3 | 1.7 ml ×6 | 1.7 ml ×12 |
| 20×ROX 참조 염료 | 200μl | 0.5ml | 1ml | 1ml × 2 |
| DNase 없는 ddH2O | 1.7ml | 1.7 ml ×2 | 10ml | 20ml |
| I교육 | 1 | 1 | 1 | 1 |
기능 및 장점
■ 간편함 - 2X PCR Mix로 실험 오류 및 작업 시간 단축
■ 특이적 - 최적화된 버퍼 및 hot-start Taq 효소는 비특이적 증폭 및 프라이머 다이머 형성을 방지할 수 있습니다.
■ 고감도 - 적은 양의 템플릿을 감지할 수 있습니다.
■ 뛰어난 다용성 - 대부분의 실시간 정량 PCR 장비와 호환 가능
키트 적용
qPCR 분석
작업 흐름
그래픽
보관 및 유효 기간
이 키트는 빛이 없는 곳에 보관해야 하며 -20℃에서 보관해야 합니다.자주 사용하면 4℃에서 단기간(10일) 보관도 가능하다.
증폭 신호 없음
1. 키트의 부적절한 보관 또는 만료로 인해 키트의 Taq DNA Polymerase가 활성을 잃습니다.
권장 사항: 키트의 보관 조건을 확인하십시오.적절한 양의 Taq DNA Polymerase를 PCR 시스템에 다시 추가하거나 관련 실험을 위해 새 Real Time PCR Kit를 구입하십시오.
2. DNA template에는 Taq DNA Polymerase의 inhibitor가 많이 존재합니다.
제안: 템플릿을 다시 정제하거나 사용되는 템플릿의 양을 줄이십시오.
3. Mg2+ 농도가 적당하지 않다.
권장사항: 당사에서 제공하는 2× Real PCR Mix의 Mg2+ 농도는 3.5mM입니다.그러나 일부 특수 프라이머 및 템플릿의 경우 Mg2+ 농도가 더 높을 수 있습니다.따라서 MgCl2를 직접 추가하여 Mg2+ 농도를 최적화할 수 있습니다.최적화를 위해 매번 Mg2+ 0.5mM을 증가시키는 것이 좋습니다.
4. PCR 증폭 조건이 적합하지 않고 프라이머 서열이나 농도가 부적절합니다.
제안: 프라이머 서열의 정확성과 프라이머가 분해되지 않았는지 확인하십시오.증폭 신호가 좋지 않으면 어닐링 온도를 낮추고 프라이머 농도를 적절하게 조정하십시오.
5.템플릿의 양이 너무 적거나 너무 많습니다.
권장 사항: 템플릿 선형화 기울기 희석을 수행하고 Real Time PCR 실험을 위해 최상의 PCR 효과가 있는 템플릿 농도를 선택합니다.
NTC의 형광 값이 너무 높습니다.
1. 작동 중 시약 오염 발생.
권장 사항: Real Time PCR 실험을 위해 새 시약으로 교체하십시오.
2. PCR 반응 시스템 준비 중 오염이 발생했습니다.
권장 사항: 라텍스 장갑 착용, 필터가 있는 피펫 팁 사용 등 작동 중에 필요한 보호 조치를 취하십시오.
3. 프라이머가 분해되고 프라이머의 분해로 인해 비특이적 증폭이 발생합니다.
제안: SDS-PAGE 전기영동을 사용하여 프라이머가 분해되었는지 여부를 감지하고 Real Time PCR 실험을 위해 새 프라이머로 교체하십시오.
프라이머 이량체 또는 비특이적 증폭
1. Mg2+ 농도가 적당하지 않다.
권장 사항: 당사에서 제공하는 2× Real PCR EasyTM Mix의 Mg2+ 농도는 3.5mM입니다.그러나 일부 특수 프라이머 및 템플릿의 경우 Mg2+ 농도가 더 높을 수 있습니다.따라서 MgCl2를 직접 추가하여 Mg2+ 농도를 최적화할 수 있습니다.최적화를 위해 매번 Mg2+ 0.5mM을 증가시키는 것이 좋습니다.
2. PCR annealing 온도가 너무 낮습니다.
제안: PCR annealing 온도를 매번 1℃ 또는 2℃씩 높입니다.
3. PCR product가 너무 길다.
권장 사항: Real Time PCR product의 길이는 100-150bp 사이여야 하며 500bp를 넘지 않아야 합니다.
4. 프라이머가 분해되고 프라이머의 분해로 인해 특정 증폭이 나타납니다.
제안: SDS-PAGE 전기영동을 사용하여 프라이머가 분해되었는지 여부를 감지하고 Real Time PCR 실험을 위해 새 프라이머로 교체하십시오.
5. PCR 시스템이 부적절하거나 시스템이 너무 작습니다.
제안: PCR 반응 시스템이 너무 작으면 검출 정확도가 떨어집니다.Real Time PCR 실험을 재실행하기 위해서는 정량적 PCR 장비에서 권장하는 반응 시스템을 사용하는 것이 가장 좋습니다.
정량 값의 불량한 반복성
1. 기기가 오작동합니다.
제안: 기기의 각 PCR 구멍 사이에 오류가 있어 온도 관리 또는 검출 시 재현성이 떨어질 수 있습니다.해당 악기의 지침에 따라 확인하십시오.
2. 샘플 순도가 좋지 않습니다.
권장 사항: 샘플이 불순하면 템플릿 및 프라이머의 순도를 포함하여 실험의 재현성이 저하됩니다.템플릿을 재정제하는 것이 가장 좋으며 프라이머는 SDS-PAGE로 가장 잘 정제됩니다.
3. PCR 시스템 준비 및 보관 시간이 너무 깁니다.
제안: 준비 직후 PCR 실험을 위해 Real Time PCR 시스템을 사용하고 너무 오래 방치하지 마십시오.
4. PCR 증폭 조건이 적합하지 않고 프라이머 서열이나 농도가 부적절합니다.
제안: 프라이머 서열의 정확성과 프라이머가 분해되지 않았는지 확인하십시오.증폭 신호가 좋지 않으면 어닐링 온도를 낮추고 프라이머 농도를 적절하게 조정하십시오.
5. PCR 시스템이 부적절하거나 시스템이 너무 작습니다.
제안: PCR 반응 시스템이 너무 작으면 검출 정확도가 떨어집니다.Real Time PCR 실험을 재실행하기 위해서는 정량적 PCR 장비에서 권장하는 반응 시스템을 사용하는 것이 가장 좋습니다.
