직접 RT-qPCR 키트 II
키트 설명:
◮Foregene이 개발한 Foreasy Reverse Transcriptase와 Foreasy HS Taq DNA Polymerase를 독자적인 reaction buffer와 함께 사용하는 Direct RT-qPCR Kit는 강한 내성과 호환성을 가지고 있으며, Foregene Lysis system을 template로 사용하여 반응을 직접 테스트할 수 있습니다.이 키트는 COVID-19 핵산 검출 키트 및 기타 병원성 박테리아 핵산 검출 키트 개발에 적용할 수 있습니다.
설명
Direct RT-qPCR Kit는 별도로 포장된 RT-qPCR 버퍼, 고효율 Foreasy HS Taq DNA Polymerase를 제공합니다.및 Foreasy Reverse Transcriptase(MMLV),간단한 검증 내에서 백엔드 키트 생성 및 시스템 조정이 편리합니다.
Foregene이 개발한 Foreasy Reverse Transcriptase와 Foreasy HS Taq DNA Polymerase를 독자적인 reaction buffer와 함께 사용하는 Direct RT-qPCR Kit는 강한 내성과 호환성을 가지고 있으며, Foregene Lysis system을 template로 사용하여 반응을 직접 테스트할 수 있습니다.이 키트는 COVID-19 핵산 검출 키트 및 기타 병원성 박테리아 핵산 검출 키트 개발에 적용할 수 있습니다.
이 키트는 쉽고 빠르게 사용하여 IVD 제품의 구성 요소가 될 수 있습니다.다시 개발할 필요 없이 손쉬운 검증만 하면 됩니다.
명세서
500T, 50,000T
키트 구성품
| 키트 내용물 (20μL 반응계) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500T | 50,000T | |
| 포이지 R역전사효소 (200U/μL) | 50μL×1 | 1mL×5 |
| Foreasy HS Taq DNA 중합효소 (5U/μL) | 100μL×1 | 1mL×10 |
| 2× 직접 RT-qPCR완충기 | 1mL ×5 | 500mL ×1 |
| 지침 | 1 | 1 |
운영 단계
A: 템플릿 및 시약 준비
1. 준비된 RNA template(RNA template 추출 및 정제는 Foregene Total RNA Isolation Kit series kit 사용 권장) 또는 sample cracking product(Foregene Lysis system 사용 권장), 특정 프라이머(10 μM) 및 기타 관련 소모품, 장비를 준비합니다.
2. 2× Direct RT-qPCR Buffer, RNase-Free ddH2O 및 20× ROX Reference Dye(필요한 경우)를 얼음과 함께 상자에 넣어 자연스럽게 녹이도록 하고 부드럽게 섞습니다.
B: RT-qPCR 시스템 준비
반응 시스템의 반응 버퍼 부피의 절반을 얻습니다(예를 들어 시스템의 부피가 20μL인 경우 10μL 2× Direct RT-qPCR 버퍼를 얻어야 합니다). 을 위한효소의 상응하는 양, 우리는 제안M-MLV: 10-30 U/20 μL 반응 시스템,탁DNA 중합효소：1-2 U/20 μL 반응 시스템이것은 우리의 제안입니다, 당신은 그것을 시험하고 조정해야 합니다), RNA 템플릿, 특정 프라이머 및 프로브 추가, RNase-Free ddH 추가2O ~ 20μL.RT-qPCR 반응 시스템의 구체적인 준비는 다음 표 1을 참조할 수 있다.
표 1: RT-qPCR 시스템 준비
| 요소 | 용량 | 최종 농도 |
| 2× 직접 RT-qPCR 버퍼 | 10μL | 1× |
| Foreasy 역전사효소(MMLV) | 10-30유 | |
| Foreasy HS Taq DNA 중합효소 | 1-2 유 | |
| 정방향 프라이머(10μM) | 0.8μL | 50-900nM |
| 리버스 프라이머(10 μM) | 0.8μL | 50-900nM |
| 프로브(4μM) | 1μL | 200nM |
| 템플릿(RNA 또는 Lysate) | X μL | |
| 20× ROX 참조 염료 | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
| 총 거래량 | 20μL |
참고: Forward Primer 및 Reverse Primer는 표적 유전자의 특정 프라이머입니다.qPCR의 시스템은 실제 실험 및 PCR 모델에 따라 조정될 수 있습니다.대부분의 프라이머의 최종 농도는 400nM을 권장합니다.준비된 농도와 권장 최종 농도에 따라 특정 프라이머 및 프로브의 양을 조절하십시오.
1*: 다양한 정량적 PCR 기기에 따라 ROX Reference Dye의 적절한 최종 농도를 선택합니다.일반적인 정량 PCR 기기의 최적 ROX 참조 염료 농도는 다음 표에 나와 있습니다.
| 정량적 PCR 기기 | ROX Reference Dye의 최종 농도 |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/스텝원,등. | 1×(예를 들어, 20μL 반응 시스템에 1μl 20×ROX Reference Dye 추가) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P 및 Mx4000 등 | 0.5×(예를 들어, 20μL 반응 시스템에 0.5μl 20×ROX Reference Dye 추가) |
| Roche PCR 기기, Bio-Rad PCR 기기, Eppendorf 정량 PCR 기기 등 | ROX 참조 염료 제외 |
보관 및 유효 기간
키트는 -20 ± 5℃에서 보관해야 합니다.즉시 -20℃ 항온 냉장고에 보관해야 합니다.유효기간은 적절한 상태로 보관할 경우 2년입니다.
